2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf

По результатам данной дипломной работы была составлена обобщённая технологическая схема производства рекомбинантного фактора роста нервов (Рисунок _ ). При наличии штамма – продуцента, производство можно начинать, со стадии ферментации.

Организационно – экономический раздел

1. Технико-экономическое обоснование нир

Фактор роста нервов (англ. nerve growth factor, NGF) один из нейротрофинов, кодируемый у человека геном NGF на коротком плече 1-й хромосоме. Представляет собой небольшой секретируемый белок. NGF играет важную роль в дифференцировке нервных клеток, а также ускоряет рост и улучшает выживание аксонов.

В связи свыше сказанным фактор роста нервов является белком, определяющим развитие симпатической нервной системы, благодаря стимуляции нервных клеток. NGF отвечает за запуск множества метаболитических путей внутри клетки, тем самым обладая большим терапевтическим потенциалом для лечения болезней в которых задействованы эти реакции.

Современные знания о данном белке позволяет его использовать при коррекции и лечение заболеваний центральной нервной системы, связанных с психическими расстройствами (слабоумие, депрессия, шизофрения, аутизм, синдром Ретта, анорексии и булимии, болезни Альцгеймера). Кроме того он играет важную роль в сердечно – сосудистых заболеваниях (атеросклероз коронарных артерий, ожирение, сахарный диабет 2 типа). Существует доказательство того, что NGF может быть полезен в лечении кожных язв и язв роговицы.

Все выше сказанное говорит о том, что создание лекарственных препаратов на основе фактора роста нервов является социально значимой проблемой. Данный белок практически невозможно выделить из природных источников. Поэтому перспективным является получение биологически активного фактора роста нервов в гетерологичных экспрессионных системах. Анализ литературы по данной проблеме показывает небольшое количество информации, что говорит об актуальности и перспективе получения рекомбинантного NGF.

2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу

2.1. Расчет материальных затрат (Cм)

Расчет затрат на основные и вспомогательные материалы, реактивы, израсходованные при выполнении дипломной работы можно определить следующим образом:

См=∑Рi∙Цi, где

Рi- количество израсходованного i-го материального ресурса, ед.;

Цi- планово-заготовительная цена единицы i-го вида материальных ресурсов, руб./ед.;

i-1,2,…n- виды ресурсов.

Расчет затрат на основные и вспомогательные материалы, реактивы, израсходованные при выполнении дипломной работы представлены в таблице 1.

Таблица 1. - Расчет материальных затрат

№	Наименование	Ед. изм.	Кол-во, ед.	Цена, руб./ед.	Сумма, Руб.
1	Трис-HCl	5 кг	0,05	5886, 00	294,3
2	Борная кислота (H3BO3)	0,5 кг	0,1	220,30	44,06
3	Бромистый этидий	25 мл	0,004	918,30	3,7
4	ЭДТА	500 г	0,04	1093,12	43,7
5	Глицерин	1 кг	0,03	300,01	9,0
6	SDS	1 кг	0,005	1101,90	5,51
7	Бромфеноловый синий	5 г	0,002	250	0,5
8	Наборы реактивов для выделения и очистки ДНК: GelElute Plasmid Miniprep Kit	350 очисток	0,0086	13623,50	116,77
9	Наборы реактивов для выделения и очистки ДНК: QIAprep Spin Miniprep Kit	350 очисток	0, 012	12765,00	153,18
10	Эндонуклеаза рестрикции: Xho I	10 Ед	0,02	2572	51,44
11	Эндонуклеаза рестрикции: Nde I	20 Ед.	0,02	2367	47,34
12	Pfu - polymerase	500Ед.	0,02	2163	43,26
13	KAPA 2G-polymerase	500Ед.	0,02	12000	240
14	T4 DNA-lygase	500Ед.	0,01	2572,00	25,72
15	Агароза	100 г	0,07	2754,80	192,8
16	Олигонуклеотидные праймеры (2 праймера)	мкл	0,1	1802, 00	180,2
17	Бакто-триптон	500 г	0,08	3671	294
18	Дрожжевой экстракт	500 г	0,16	3364	538,2
19	Натрий хлористый (NaCl)	1 кг	0,1	270,67	27,1
20	Бакто-агар	500 г	0,022	6450,5	142,1
21	APS	50 г	0,16	168,17	26,9
22	2-меркаптоэтанол	100 мл		639,06	6,4
23	Уксусная кислота	3 л	0,4	256,65	103
24	Кальций хлористый 2Н2О (СaCl2)	500 г	0,002	368,6	0,7
25	PEG	500 г	0,0015	3354,26	5,0
26	KH2PO4	1 кг	0,048	369,98	17,8
27	Натрий фосфорнокислый двузамещенный 2Н2О (Na2HPO4·2H2O)	1 кг	0,046	804	37
28	Аммоний сернокислый ((NH4)2SO4)	500 г	0,05	324.81	16,3
29	Глюкоза	500 г	0,02	324,81	6,5
30	Лактоза	500 г	0,03	919,71	27,6
31	Магний сернокислый 7Н2О (MgSO4*7Н2О)	500 г	0,024	308,69	7,4
32	Канамицин	50 г	0,05	5935,24	296,8
33	Сахароза	500 г	0,07	293,60	20,6
34	Фенилметилсульфонилфторид (PMSF)	5 г	0,0128	1009,03	13,0
35	Мочевина	1 кг	0.5	836	418
36	Глицин	1кг	0,02	1348,56	27
37	Имидазол	1кг	0,015	1039,92	15,6
38	Соляная кислота (HCl)	1 л	0,35	113,28	39,6
39	Натрий гидроокись (NaOH)	1 кг	0,025	498	12,45
40	Спирт этиловый	17,3 л	0,046	1500	70
Итого	3619,97 руб.

Цены на материалы взяты из прайс-листа ООО «ДИА-М».

Борная кислота (H₃BO₃) ГОСТ 18704-78; соляная кислота (HCl) ГОСТ 14261-77; натрий гидроокись (NaOH) ГОСТ 4328-77; спирт этиловый ГОСТ 5962-77.