- •Реферат
- •Введение
- •Обзор и анализ научно технической и патентной информации.
- •Нейтрофины.
- •Общая характеристика.
- •1.2 Нейротрофины в цнс
- •2. Рецепторы нейтрофинов.
- •2.1Высокоаффинный рецептор к нейротрофинам pl40 prototrk
- •2.2 Низкоаффинный рецептор к нейротрофинам p75lntr.
- •Фактор роста нервов.
- •История открытия
- •3.2 Молекулярная характеристика.
- •Третичная структура.
- •3.4 Механизм взаимодействия ngf с рецепторами.
- •3.5 Захват и ретроградный транспорт ngf.
- •3.6 Функции ngf в организме.
- •3.6.1 Действие ngf на нервные клетки.
- •3.6.2 Значение ngf в метаболизме.
- •3.6.3 Участие ngf в патологических состояниях.
- •4. Современные достижения в получении рекомбинантного ngf для фармацевтической индустрии.
- •5 Экспрессия рекомбинантных генов.
- •5.1 Вводная часть.
- •5.2 Конструирование экспрессионных векторов и их функционирование.
- •5.3 Факторы, оказывающие влияние на эффективность экспрессии рекомбинантных генов.
- •6 Выводы по разделу
- •Основная часть
- •1. Материалы, методы и оборудование
- •1.1 Оборудование
- •1.2 Программное обеспечение
- •1.3 Лабораторные посуда и расходные материалы.
- •1.4 Штаммы e.Coli
- •1.5 Среды для выращивания бактерий
- •1.6 Препараты днк
- •1.7 Ферменты
- •1.7 Реактивы и наборы реактивов
- •Приготовление рвs буфера (х10):
- •10% Уксусная кислота
- •1.9.1 Рестрикция
- •1.9.2 Электрофоретичское разделение днк в агарозном геле.
- •1.9.3 Выделение днк из агарозного геля.
- •1.9.4. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •1.9.5 Лигирование.
- •1.9.6 Pipes трансформация клеток e. Coli плазмидной днк
- •1.9.7 Культивирование, выделение и очистка плазмидной днк из клеток e. Coli
- •1.9.8 Проведение пцр-скрининга.
- •1.9.9 Секвенированиеплазмидной днк.
- •1.9.10 Быстрая трансформация.
- •1.9.11 Анализ экспрессии целевого гена.
- •1.9.12 Выделение суммарного (общего) белка из клеток e. Сoli.
- •1.9.14 Фракционирование белков из клеток e. Сoli.
- •1.9.15 Денатурирующий белковый электрофорез в sds-пааг.
- •1.9.16 Отмывка телец включения
- •1.9.17 Растворение телец включения
- •1.9.18 Выделение SumoNgf при помощи металло-хелат-аффинной хроматографии
- •1.9.19 Рефолдинг белка
- •1.9.20 Расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2. Экспериментальные исследования
- •2.1 Получение векторных конструкций.
- •2.1.1 Сборка гена ngf методом пцр.
- •2.1.2 Получение векторной конструкции pTngf
- •2.1.3 Получение гибридной последовательности SumoNgf.
- •2.1.4 Получение векторной конструкции pTSumoNgf.
- •2.2 Биосинтез целевого и гибридного белка. Подбор условий культивирования.
- •2.2.1 Биосинтез белка ngf.
- •2.2.1 Биосинтез гибридного белка SumoNgf.
- •2.3 Выделение и очистка рекомбинантного фактора роста нервов человека.
- •2.3.1 Отмывка и растворение телец включения
- •2.3.2 Металло-хелатная аффинная хроматография
- •2.3.3 Масс-спектрометрия гибридного белка ngf
- •2.3.4 Рефолдинг гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Ферментативное расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Очистка ngf на катионобменной хроматографии.
- •2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf
- •Организационно – экономический раздел
- •Технико-экономическое обоснование нир
- •2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу
- •2.1. Расчет материальных затрат (Cм)
- •2.2. Энергетические затраты.
- •4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
- •2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
- •4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
- •2.6. Накладные расходы.
- •3 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Краткая характеристика выполняемой работы.
- •2 Опасные и вредные производственные факторы на основных стадиях выполнения дипломной работы.
- •3 Перечень наиболее опасных мест на стадиях выполнения дипломной работы.
- •Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
- •5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
- •6 Производственная санитария.
- •6.1 Установление категории лабораторного помещения.
- •6.2 Разработка мероприятий по работе с вредными веществами.
- •6.3 Метеорологические условия.
- •6.4 Вентиляция.
- •6.5 Освещение.
- •6.7 Отопление.
- •7 Техника безопасности.
- •7.1 Электробезопасность.
- •7.2 Пожарная профилактика.
- •8. Выводы по разделу.
4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
Суммарная заработная плата состоит из заработной платы исполнителя (студента) - ЗПЛис. и заработной платы руководителя дипломной работы- ЗПЛрук.
ЗПЛис.=См∙n, где
См- месячная стипендия, руб.
См=2500 руб./мес.
n- количество месяцев выполнения дипломной работы.
n=6 мес.
ЗПЛрук.=35∙Т, где
80 - общая нагрузка по руководству дипломной работой, ч
Т - часовая оплата труда руководителей на момент расчета.
Т= 450 руб./ч.
ЗПЛ (доп) – премия в размере 20 %
ЗПЛис.=10∙2500=25000 руб.
ЗПЛис (доп)=25000*0,2=5000 руб
ЗПЛис (сум)=25000 +5000=30000 руб.
ЗПЛрук.=80∙450=36000 руб.
ЗПЛрук (доп)=36000*0,2=7200 руб.
ЗПЛрук (сум)= 36000+ 7200=43200 руб.
Суммарная заработная плата:
ЗПЛсум.= ЗПЛис.+ ЗПЛрук.=43200 +30000 =73200 руб.
Отчисления на социальные нужды составляют 30% от заработной платы руководителя с доп. начислениями:
О.с.н.=43200*0.30=12960 руб. Итого: 73200+12960=86160 руб.
2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
Затраты на стеклянную посуду и пластик представлены в таблицах 4 и 5.
Таблица 4. - Расчет затрат на стеклянную посуду.
№ п/п |
Наименование посуды |
Количество, шт. |
Стоимость единицы, руб. |
Сумма, руб. |
|
1 |
Коническая колба 150 мл |
7 |
69,15 |
484,05 |
|
2 |
Коническая колба 250 мл |
2 |
73,22 |
146,44 |
|
3 |
Стакан лабораторный 10 мл |
2 |
65,89 |
131,78 |
|
4 |
Стакан лабораторный 25 мл |
3 |
63,52 |
190,56 |
|
5 |
Стакан лабораторный 50 мл |
3 |
62,28 |
186,84 |
|
6 |
Стакан лабораторный 100 мл |
2 |
61,37 |
122,74 |
|
7 |
Стакан лабораторный 150 мл |
2 |
63,63 |
127,26 |
|
8 |
Стакан лабораторный 250мл |
2 |
63,63 |
127,26 |
|
9 |
Стакан лабораторный 1000 мл |
1 |
135,59 |
135,59 |
|
10 |
Цилиндр 25 мл |
1 |
185,61 |
185,61 |
|
11 |
Цилиндр 50 мл |
2 |
198,60 |
397,2 |
|
12 |
Цилиндр 100 мл |
2 |
220,13 |
440,26 |
|
13 |
Цилиндр 250 мл |
1 |
325,73 |
325,73 |
|
14 |
Цилиндр 500 мл |
1 |
445,54 |
445,54 |
|
15 |
Цилиндр 1000мл |
1 |
674,60 |
674,6 |
|
16 |
Банка с крышкой 100 мл |
5 |
86,44 |
432,2 |
|
17 |
Банка с крышкой 250 мл |
10 |
91,36 |
913,6 |
|
18 |
Банка с крышкой 500 мл |
5 |
115,25 |
576,25 |
|
19 |
Банка с крышкой 1000 мл |
2 |
144,30 |
288,6 |
|
20 |
Банка с крышкой 2000 мл |
3 |
376,20 |
1128,6 |
|
Итого |
7460,71 |
.
Таблица 5. - Расчет затрат на материалы из пластика.
№ п/п |
Наименование пластика |
Количество, шт. |
Стоимость единицы, руб. |
Сумма, руб. |
1 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 0,2 мл |
40 |
1,31 |
52,4 |
2 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 0,5 мл |
250 |
1,1 |
275 |
3 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 1,5 мл |
750 |
0,713 |
534,75 |
4 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 2,0 мл |
200 |
0,814 |
162,8 |
5 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 15 мл |
350 |
7,7 |
2695 |
6 |
Полипропиленовые пробирки емкостью 50 мл |
250 |
9,8 |
2450 |
7 |
Чашки с крышкой Петри |
25 |
5,38 |
134,5 |
8 |
Наконечники для дозатора 5 мл |
50 |
11,7 |
585 |
9 |
Наконечники для дозатора 10 мл |
50 |
11,23 |
561,5 |
10 |
Наконечники для дозатора 25 мл |
35 |
22,02 |
770,7 |
11 |
Наконечники для дозатора 50 мл |
10 |
25,74 |
257,4 |
12 |
Наконечники для автоматических пипеток 1 мл |
1000 |
1,528 |
1528 |
13 |
Наконечники для автоматических пипеток 0,2 мл |
2000 |
0,38 |
760 |
14 |
Шприцевые насадки для фильтрования 0.22 m |
30 |
48,13 |
1443,9 |
15 |
Кюветы |
30 |
2,85 |
85,5 |
16 |
Шпатель одноразовый |
50 |
1.50 |
75 |
17 |
Петля бактериологическая |
100 |
0.90 |
90 |
Итого |
12461,45 |