- •Реферат
- •Введение
- •Обзор и анализ научно технической и патентной информации.
- •Нейтрофины.
- •Общая характеристика.
- •1.2 Нейротрофины в цнс
- •2. Рецепторы нейтрофинов.
- •2.1Высокоаффинный рецептор к нейротрофинам pl40 prototrk
- •2.2 Низкоаффинный рецептор к нейротрофинам p75lntr.
- •Фактор роста нервов.
- •История открытия
- •3.2 Молекулярная характеристика.
- •Третичная структура.
- •3.4 Механизм взаимодействия ngf с рецепторами.
- •3.5 Захват и ретроградный транспорт ngf.
- •3.6 Функции ngf в организме.
- •3.6.1 Действие ngf на нервные клетки.
- •3.6.2 Значение ngf в метаболизме.
- •3.6.3 Участие ngf в патологических состояниях.
- •4. Современные достижения в получении рекомбинантного ngf для фармацевтической индустрии.
- •5 Экспрессия рекомбинантных генов.
- •5.1 Вводная часть.
- •5.2 Конструирование экспрессионных векторов и их функционирование.
- •5.3 Факторы, оказывающие влияние на эффективность экспрессии рекомбинантных генов.
- •6 Выводы по разделу
- •Основная часть
- •1. Материалы, методы и оборудование
- •1.1 Оборудование
- •1.2 Программное обеспечение
- •1.3 Лабораторные посуда и расходные материалы.
- •1.4 Штаммы e.Coli
- •1.5 Среды для выращивания бактерий
- •1.6 Препараты днк
- •1.7 Ферменты
- •1.7 Реактивы и наборы реактивов
- •Приготовление рвs буфера (х10):
- •10% Уксусная кислота
- •1.9.1 Рестрикция
- •1.9.2 Электрофоретичское разделение днк в агарозном геле.
- •1.9.3 Выделение днк из агарозного геля.
- •1.9.4. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •1.9.5 Лигирование.
- •1.9.6 Pipes трансформация клеток e. Coli плазмидной днк
- •1.9.7 Культивирование, выделение и очистка плазмидной днк из клеток e. Coli
- •1.9.8 Проведение пцр-скрининга.
- •1.9.9 Секвенированиеплазмидной днк.
- •1.9.10 Быстрая трансформация.
- •1.9.11 Анализ экспрессии целевого гена.
- •1.9.12 Выделение суммарного (общего) белка из клеток e. Сoli.
- •1.9.14 Фракционирование белков из клеток e. Сoli.
- •1.9.15 Денатурирующий белковый электрофорез в sds-пааг.
- •1.9.16 Отмывка телец включения
- •1.9.17 Растворение телец включения
- •1.9.18 Выделение SumoNgf при помощи металло-хелат-аффинной хроматографии
- •1.9.19 Рефолдинг белка
- •1.9.20 Расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2. Экспериментальные исследования
- •2.1 Получение векторных конструкций.
- •2.1.1 Сборка гена ngf методом пцр.
- •2.1.2 Получение векторной конструкции pTngf
- •2.1.3 Получение гибридной последовательности SumoNgf.
- •2.1.4 Получение векторной конструкции pTSumoNgf.
- •2.2 Биосинтез целевого и гибридного белка. Подбор условий культивирования.
- •2.2.1 Биосинтез белка ngf.
- •2.2.1 Биосинтез гибридного белка SumoNgf.
- •2.3 Выделение и очистка рекомбинантного фактора роста нервов человека.
- •2.3.1 Отмывка и растворение телец включения
- •2.3.2 Металло-хелатная аффинная хроматография
- •2.3.3 Масс-спектрометрия гибридного белка ngf
- •2.3.4 Рефолдинг гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Ферментативное расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Очистка ngf на катионобменной хроматографии.
- •2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf
- •Организационно – экономический раздел
- •Технико-экономическое обоснование нир
- •2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу
- •2.1. Расчет материальных затрат (Cм)
- •2.2. Энергетические затраты.
- •4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
- •2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
- •4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
- •2.6. Накладные расходы.
- •3 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Краткая характеристика выполняемой работы.
- •2 Опасные и вредные производственные факторы на основных стадиях выполнения дипломной работы.
- •3 Перечень наиболее опасных мест на стадиях выполнения дипломной работы.
- •Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
- •5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
- •6 Производственная санитария.
- •6.1 Установление категории лабораторного помещения.
- •6.2 Разработка мероприятий по работе с вредными веществами.
- •6.3 Метеорологические условия.
- •6.4 Вентиляция.
- •6.5 Освещение.
- •6.7 Отопление.
- •7 Техника безопасности.
- •7.1 Электробезопасность.
- •7.2 Пожарная профилактика.
- •8. Выводы по разделу.
4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
Амортизационные отчисления (Сам.) определяют исходя из стоимости используемого оборудования и приборов, годовых норм амортизации и времени их использования (в месяцах):
n
Сам.= ∑Фi∙Наi∙Тi/(100∙12)
i=1
Фi- стоимость используемых приборов, руб.;
Наi- годовая норма амортизационных отчислений;
Тi- время работы приборов и оборудования в течение срока выполнения дипломной работы.
Результаты расчетов представлены в таблице 6.
Таблица 6. – Расчет амортизационных отчислений.
|
Наименование приборов и оборудования |
Стоимость, руб.
|
Время работы приборов, мес. |
Доля использования оборудования
|
На%
|
Сумма амортизационных отчислений, руб.
|
||||||
1 |
Центрифуга |
291038,59 |
0,0833 |
0,7 |
10 |
141.4205 |
||||||
2 |
Настольная микроцентрифуга |
30775,37 |
0,0417 |
1 |
15 |
16.04166 |
||||||
3 |
Термомиксер |
61230 |
0,0083 |
0,3 |
10 |
1.270523 |
||||||
4 |
Термоциклер для ПЦР |
150940 |
0,0139 |
0,2 |
10 |
3.496777 |
||||||
5 |
pH-метр |
4270 |
0,0028 |
0,7 |
15 |
0.104615 |
||||||
6 |
Горизонтальная камера для электрофореза нуклеиновых кислот |
16365 |
0,0069 |
0,3 |
5 |
0.141148 |
||||||
7 |
УФ-трансиллюминатор |
19570 |
0,0069 |
0,2 |
5 |
0.112528 |
||||||
8 |
Воздушный термостат |
38409,25 |
0,0014 |
0,3 |
5 |
0.067216 |
||||||
9 |
Мешалка |
12250 |
0,1181 |
0,7 |
15 |
12.65884 |
||||||
10 |
Мешалка c подогревом |
14330 |
0,1667 |
0,1 |
15 |
2.986014 |
||||||
11 |
Вакуумный насос |
22350 |
0,0028 |
0,7 |
8 |
0.29204 |
||||||
12 |
Установки для очистки воды |
204199,92 |
0,64 |
1 |
10 |
1089.066 |
||||||
13 |
Напольный инкубатор-шейкер |
373383,00 |
0,1667 |
0,8 |
5 |
207.4765 |
||||||
14 |
Кельвинатор |
450000 |
0,6389 |
1 |
5 |
2197.938 |
||||||
15 |
Холодильник |
12520 |
0,8333 |
1 |
5 |
43.47048 |
||||||
16 |
Ламинарный бокс |
268540 |
4 |
0,3 |
5 |
1342.7 |
||||||
17 |
Автоклав |
324193,00 |
4 |
0,5 |
8 |
4322.573 |
||||||
18 |
Сверхточные весы |
42480,00 |
0,0625 |
0,2 |
10 |
4.425 |
||||||
19 |
Вертиктикальная камера для электрофореза белков |
37272 |
0,0278 |
0,8 |
5 |
3.453872 |
||||||
20 |
Ультразвуковой дезинтегратор |
4459276 |
0,0833 |
0,5 |
10 |
1547.74 |
||||||
21 |
Хроматограф |
2576000 |
0,0417 |
0,5 |
10 |
447.58 |
||||||
22 |
Спектрофотометр |
166200 |
0,0083 |
1 |
10 |
11.4955 |
||||||
23 |
Компьютер |
22550 |
0,0139 |
1 |
10 |
2.612042 |
||||||
Итого |
11556.62 |
|||||||||||