- •Реферат
- •Введение
- •Обзор и анализ научно технической и патентной информации.
- •Нейтрофины.
- •Общая характеристика.
- •1.2 Нейротрофины в цнс
- •2. Рецепторы нейтрофинов.
- •2.1Высокоаффинный рецептор к нейротрофинам pl40 prototrk
- •2.2 Низкоаффинный рецептор к нейротрофинам p75lntr.
- •Фактор роста нервов.
- •История открытия
- •3.2 Молекулярная характеристика.
- •Третичная структура.
- •3.4 Механизм взаимодействия ngf с рецепторами.
- •3.5 Захват и ретроградный транспорт ngf.
- •3.6 Функции ngf в организме.
- •3.6.1 Действие ngf на нервные клетки.
- •3.6.2 Значение ngf в метаболизме.
- •3.6.3 Участие ngf в патологических состояниях.
- •4. Современные достижения в получении рекомбинантного ngf для фармацевтической индустрии.
- •5 Экспрессия рекомбинантных генов.
- •5.1 Вводная часть.
- •5.2 Конструирование экспрессионных векторов и их функционирование.
- •5.3 Факторы, оказывающие влияние на эффективность экспрессии рекомбинантных генов.
- •6 Выводы по разделу
- •Основная часть
- •1. Материалы, методы и оборудование
- •1.1 Оборудование
- •1.2 Программное обеспечение
- •1.3 Лабораторные посуда и расходные материалы.
- •1.4 Штаммы e.Coli
- •1.5 Среды для выращивания бактерий
- •1.6 Препараты днк
- •1.7 Ферменты
- •1.7 Реактивы и наборы реактивов
- •Приготовление рвs буфера (х10):
- •10% Уксусная кислота
- •1.9.1 Рестрикция
- •1.9.2 Электрофоретичское разделение днк в агарозном геле.
- •1.9.3 Выделение днк из агарозного геля.
- •1.9.4. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •1.9.5 Лигирование.
- •1.9.6 Pipes трансформация клеток e. Coli плазмидной днк
- •1.9.7 Культивирование, выделение и очистка плазмидной днк из клеток e. Coli
- •1.9.8 Проведение пцр-скрининга.
- •1.9.9 Секвенированиеплазмидной днк.
- •1.9.10 Быстрая трансформация.
- •1.9.11 Анализ экспрессии целевого гена.
- •1.9.12 Выделение суммарного (общего) белка из клеток e. Сoli.
- •1.9.14 Фракционирование белков из клеток e. Сoli.
- •1.9.15 Денатурирующий белковый электрофорез в sds-пааг.
- •1.9.16 Отмывка телец включения
- •1.9.17 Растворение телец включения
- •1.9.18 Выделение SumoNgf при помощи металло-хелат-аффинной хроматографии
- •1.9.19 Рефолдинг белка
- •1.9.20 Расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2. Экспериментальные исследования
- •2.1 Получение векторных конструкций.
- •2.1.1 Сборка гена ngf методом пцр.
- •2.1.2 Получение векторной конструкции pTngf
- •2.1.3 Получение гибридной последовательности SumoNgf.
- •2.1.4 Получение векторной конструкции pTSumoNgf.
- •2.2 Биосинтез целевого и гибридного белка. Подбор условий культивирования.
- •2.2.1 Биосинтез белка ngf.
- •2.2.1 Биосинтез гибридного белка SumoNgf.
- •2.3 Выделение и очистка рекомбинантного фактора роста нервов человека.
- •2.3.1 Отмывка и растворение телец включения
- •2.3.2 Металло-хелатная аффинная хроматография
- •2.3.3 Масс-спектрометрия гибридного белка ngf
- •2.3.4 Рефолдинг гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Ферментативное расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Очистка ngf на катионобменной хроматографии.
- •2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf
- •Организационно – экономический раздел
- •Технико-экономическое обоснование нир
- •2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу
- •2.1. Расчет материальных затрат (Cм)
- •2.2. Энергетические затраты.
- •4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
- •2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
- •4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
- •2.6. Накладные расходы.
- •3 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Краткая характеристика выполняемой работы.
- •2 Опасные и вредные производственные факторы на основных стадиях выполнения дипломной работы.
- •3 Перечень наиболее опасных мест на стадиях выполнения дипломной работы.
- •Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
- •5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
- •6 Производственная санитария.
- •6.1 Установление категории лабораторного помещения.
- •6.2 Разработка мероприятий по работе с вредными веществами.
- •6.3 Метеорологические условия.
- •6.4 Вентиляция.
- •6.5 Освещение.
- •6.7 Отопление.
- •7 Техника безопасности.
- •7.1 Электробезопасность.
- •7.2 Пожарная профилактика.
- •8. Выводы по разделу.
2.2. Энергетические затраты.
Затраты на электроэнергию рассчитываются по формуле:
n n
Сэл./эн.= ∑Рi∙Ц=∑Мi∙К∙Тi∙Ц
i=1 i=1
Рi- расход электроэнергии на i-том виде оборудования, кВт∙ч;
Мi- паспортная мощность электрооборудования, кВт;
К- коэффициент использования мощности, К=0.8-0.9;
Тi- время работы электрооборудования, ч.;
Ц- цена 1 кВт∙часа, руб./кВт∙ч
Все полученные результаты расчетов представлены в таблице 2
Таблица 2. - Расчет затрат на электроэнергию.
№
|
Наименование оборудования
|
Число единиц оборудования, шт
|
Номинальная мощность ед. оборудования, кВт∙ч
|
Коэф. использования мощности
|
Время работы оборудования, ч
|
Цена за 1 кВт∙ч, руб./кВт∙ч
|
Доля использования оборудования
|
Сумма затрат, руб. |
|
1 |
Центрифуга |
1 |
0,8 |
0,8 |
60 |
5 |
0,7 |
134,4 |
|
2 |
Настольная микроцентрифуга |
2 |
0,4 |
0,8 |
30 |
5 |
1 |
96 |
|
3 |
Термомиксер |
1 |
0,2 |
0,8 |
6 |
5 |
0,3 |
15,84 |
|
4 |
Амплификатор для ПЦР |
1 |
0,15 |
0,8 |
10 |
5 |
0,2 |
1,2 |
|
5 |
pH-метр |
1 |
0,05 |
0,8 |
5 |
5 |
0,7 |
0,7 |
|
6 |
Горизонтальная камера для электрофореза нуклеиновых кислот |
1 |
0,015 |
0,8 |
5 |
5 |
0,3 |
0,09
|
|
7 |
УФ-трансиллюминатор |
1 |
0,055 |
0,8 |
1 |
5 |
0,2 |
26,4 |
|
8 |
Воздушный термостат |
1 |
0,5 |
0,8 |
400 |
5 |
0,3 |
240 |
|
9 |
Мешалка |
2 |
0,025 |
0,5 |
120 |
5 |
0,7 |
10,5 |
|
10 |
Мешалка c подогревом |
1 |
0,625 |
0,5 |
2 |
5 |
0,1 |
0,31 |
|
11 |
Вакуумный насос |
1 |
0,05 |
0,8 |
120 |
5 |
0,7 |
16,8 |
|
12 |
Установки для очистки воды |
1 |
0,07 |
0,8 |
460 |
5 |
1 |
128,8 |
|
13 |
Напольный инкубатор-шейкер |
1 |
1 |
0,5 |
700 |
5 |
0,8 |
1400 |
|
14 |
Кельвинатор |
1 |
0,7 |
0,8 |
2880 |
5 |
1 |
8064 |
|
15 |
Холодильник |
3 |
0,15 |
0,8 |
2880 |
5 |
1 |
5814 |
|
16 |
Ламинарный бокс |
1 |
0,2 |
0,8 |
45 |
5 |
0,3 |
10,8 |
|
17 |
Автоклав |
1 |
2 |
0,8 |
20 |
5 |
0,5 |
80 |
|
18 |
Сверхточные весы |
1 |
0,05 |
0,8 |
1 |
5 |
0,2 |
0,04 |
|
19 |
Вертиктикальная камера для электрофореза белков |
1 |
0,015 |
0,8 |
50 |
5 |
0,8 |
2,4 |
|
20 |
Ультразвуковой дезинтегратор |
1 |
0,45 |
0,5 |
9 |
5 |
0,5 |
5,1 |
|
21 |
Хроматограф |
1 |
0,12 |
0,8 |
400 |
5 |
0,5 |
96 |
|
22 |
Спектрофотометр |
1 |
0,1 |
0,8 |
120 |
5 |
1 |
48 |
|
23 |
Компьютер |
1 |
0,3 |
0,8 |
1000 |
5 |
1 |
1200 |
|
Итого |
17391,38 |
||||||||
Затраты на различные виды водных ресурсов представлены в таблице 3.
Таблица 3. - Расчет затрат на воду.
|
Вид ресурса
|
Израсходованное количество, м3 |
Цена, руб./м3
|
Сумма затрат, руб.
|
|
1 |
Вода водопроводнаяхолодная |
15 |
21,84 |
327,60 |
|
2 |
Вода дистиллированная |
0,8 |
10000 |
8000 |
|
3 |
Вода очищенная |
0,7 |
22500 |
15750 |
|
Итого |
24077,60 |
||||