- •Реферат
- •Введение
- •Обзор и анализ научно технической и патентной информации.
- •Нейтрофины.
- •Общая характеристика.
- •1.2 Нейротрофины в цнс
- •2. Рецепторы нейтрофинов.
- •2.1Высокоаффинный рецептор к нейротрофинам pl40 prototrk
- •2.2 Низкоаффинный рецептор к нейротрофинам p75lntr.
- •Фактор роста нервов.
- •История открытия
- •3.2 Молекулярная характеристика.
- •Третичная структура.
- •3.4 Механизм взаимодействия ngf с рецепторами.
- •3.5 Захват и ретроградный транспорт ngf.
- •3.6 Функции ngf в организме.
- •3.6.1 Действие ngf на нервные клетки.
- •3.6.2 Значение ngf в метаболизме.
- •3.6.3 Участие ngf в патологических состояниях.
- •4. Современные достижения в получении рекомбинантного ngf для фармацевтической индустрии.
- •5 Экспрессия рекомбинантных генов.
- •5.1 Вводная часть.
- •5.2 Конструирование экспрессионных векторов и их функционирование.
- •5.3 Факторы, оказывающие влияние на эффективность экспрессии рекомбинантных генов.
- •6 Выводы по разделу
- •Основная часть
- •1. Материалы, методы и оборудование
- •1.1 Оборудование
- •1.2 Программное обеспечение
- •1.3 Лабораторные посуда и расходные материалы.
- •1.4 Штаммы e.Coli
- •1.5 Среды для выращивания бактерий
- •1.6 Препараты днк
- •1.7 Ферменты
- •1.7 Реактивы и наборы реактивов
- •Приготовление рвs буфера (х10):
- •10% Уксусная кислота
- •1.9.1 Рестрикция
- •1.9.2 Электрофоретичское разделение днк в агарозном геле.
- •1.9.3 Выделение днк из агарозного геля.
- •1.9.4. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •1.9.5 Лигирование.
- •1.9.6 Pipes трансформация клеток e. Coli плазмидной днк
- •1.9.7 Культивирование, выделение и очистка плазмидной днк из клеток e. Coli
- •1.9.8 Проведение пцр-скрининга.
- •1.9.9 Секвенированиеплазмидной днк.
- •1.9.10 Быстрая трансформация.
- •1.9.11 Анализ экспрессии целевого гена.
- •1.9.12 Выделение суммарного (общего) белка из клеток e. Сoli.
- •1.9.14 Фракционирование белков из клеток e. Сoli.
- •1.9.15 Денатурирующий белковый электрофорез в sds-пааг.
- •1.9.16 Отмывка телец включения
- •1.9.17 Растворение телец включения
- •1.9.18 Выделение SumoNgf при помощи металло-хелат-аффинной хроматографии
- •1.9.19 Рефолдинг белка
- •1.9.20 Расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2. Экспериментальные исследования
- •2.1 Получение векторных конструкций.
- •2.1.1 Сборка гена ngf методом пцр.
- •2.1.2 Получение векторной конструкции pTngf
- •2.1.3 Получение гибридной последовательности SumoNgf.
- •2.1.4 Получение векторной конструкции pTSumoNgf.
- •2.2 Биосинтез целевого и гибридного белка. Подбор условий культивирования.
- •2.2.1 Биосинтез белка ngf.
- •2.2.1 Биосинтез гибридного белка SumoNgf.
- •2.3 Выделение и очистка рекомбинантного фактора роста нервов человека.
- •2.3.1 Отмывка и растворение телец включения
- •2.3.2 Металло-хелатная аффинная хроматография
- •2.3.3 Масс-спектрометрия гибридного белка ngf
- •2.3.4 Рефолдинг гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Ферментативное расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Очистка ngf на катионобменной хроматографии.
- •2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf
- •Организационно – экономический раздел
- •Технико-экономическое обоснование нир
- •2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу
- •2.1. Расчет материальных затрат (Cм)
- •2.2. Энергетические затраты.
- •4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
- •2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
- •4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
- •2.6. Накладные расходы.
- •3 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Краткая характеристика выполняемой работы.
- •2 Опасные и вредные производственные факторы на основных стадиях выполнения дипломной работы.
- •3 Перечень наиболее опасных мест на стадиях выполнения дипломной работы.
- •Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
- •5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
- •6 Производственная санитария.
- •6.1 Установление категории лабораторного помещения.
- •6.2 Разработка мероприятий по работе с вредными веществами.
- •6.3 Метеорологические условия.
- •6.4 Вентиляция.
- •6.5 Освещение.
- •6.7 Отопление.
- •7 Техника безопасности.
- •7.1 Электробезопасность.
- •7.2 Пожарная профилактика.
- •8. Выводы по разделу.
Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
Данные свойства используемых в работе веществ указанны в таблице 2.
Таблица 2.- Свойства обращающихся в производстве веществ.
Наименование вещества |
Агрегатное состояние в условиях производства |
Физико-химические свойства |
Токсические свойства
|
Средства Индивидуальной защиты |
|
Токсический характер действия на организм, возможные пути поступления |
ПДКр.з. мг/м3; класс опасности |
||||
Кислота соляная – HCl |
Жидкость |
Растворима в воде |
Вызывает раздражение слизистых оболочек носа и глаз. При попадании на кожу вызывает тяжёлые ожоги. |
0,5 Класс опасности 2 |
Защитные очки, резиновые перчатки, фартук и респиратор |
Спирт этиловый |
Жидкость |
Растворим в воде |
- |
1000 Класс опасности 4 |
- |
Водный аммиак |
Жидкость |
Содержит 25% газообраз-ного аммиака. Бесцветная жидкость с резким запахом, обладает сильно-щелочными свойствами. |
Высокие концентрации вызывают обильное слезоточение, удушье, кашель, головокружение. |
20 Класс опасности 2 |
Защитные очки, спецодежда резиновый фартук, резиновые перчатки, резиновые сапоги |
Едкий натр |
Твердое вещество |
Образует гидраты с водой. При растворении раствор сильно разогревает-ся. Свободно растворим в глицерине и спирте. |
Действует на кожу и слизистые оболочки прижигающе, раздражает кожу, вызвает дерматиты. Опасно попадание даже малых количеств в глаза. |
0,5 мг/м3 Класс опасности 2 |
Защитные очки, резиновые перчатки и фартук.
|
Бромистый этидий |
Жидкость |
Растворим в воде |
Сильнейший мутаген. Даже при попадании минимальных количеств способен вызвать тяжелые последствия |
неизвестно, Класс опасности 1 |
Защитные очки, резиновые перчатки и фартук.
|
Данные таблицы показывают, что проводимая работа связана с веществами 2 и 1 класса опасности, в связи с этим работы нужно проводить аккуратно и только в специальной одежде, контролируя ПДК данных веществ в рабочем помещении.
5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
Все работающие в лаборатории должны иметь спецодежду, уметь пользоваться СТО. Все новые работники проходят инструктаж и обучение по технике безопасности, приемам и методам работы независимо от стажа и квалификации.
Вводный инструктаж - ознакомление с основными законодательными документами по ОТ. В ходе него рассказывается о присутствии вредных веществ в лаборатории, правилах внутреннего трудового распорядка, основных положениях «Трудового Кодекса».
Первичный инструктаж на рабочем месте проводится заведующим лабораторией.
Повторный инструктаж для закрепления и проверки знаний работающие проводится раз в полгода в объеме инструкции по данному рабочему месту.
Внеплановый инструктаж проводится при изменении правил по ОТ, если имеет место несчастный случай.
Специальный текущий инструктаж проводится при направлении рабочего на временную работу.
Перед началом работы был проведен вводный инструктаж по технике безопасности и производственной санитарии. Был ознакомлен с инструкциями:
Правила работы в лаборатории.
Инструкция по обслуживанию аппаратов, работающих под давлением.
Правила работы в боксе.
Инструкция по работе с непатогенными и условно-патогенными микроорганизмами.
Инструкция по работе с щелочами и кислотами.
Инструкция по работе с ультразвуковой установкой.
Для выполнения дипломной работы были выдана следующие средства индивидуальной защиты: защитная одежда (халат), специальная обувь, резиновые перчатки.