- •Часть I
- •§ I. А) Оборудование рабочего места.
- •§ 7. Метод люминесцентной микроскопии.
- •§ I. Устройство электронного микроскопа.
- •§2. Методы электронно-микроскопического препарирования.
- •§3. Методы получения ультратонких срезов
- •§ 4. Демонстрация ультратонких срезов бактериальных клеток в электронном микроскопе.
- •§ 5. Описание метода микроскопии в темном поле см. В методических указаниях к 4 практическому занятию.
- •§ 2. Посмотреть под микроскопом препарат-мазок из культуры бактерий, имеющих жгутики, и зарисовать. Препарат окрашен по методу Бениньетти.
- •§ 3. Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.
- •§ 4. Окраска зерен волютина по Нейссеру.
- •§ 5. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса.
- •§ 3. Метод микроскопии в темном поле.
- •§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.
- •3Анятие 5
- •§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки мпа и среды Эндо.
- •§ 4. Результаты посева на среды пестрого ряда зарегистрировать в таблице.
- •§ 5. Приготовить взвесь почвы в Физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Тароцци.
- •§ 4. А) Определение дифтерийного экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
- •§ 7. Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
- •§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном мпа. Зарисовать картину гемолиза.
- •§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пересылки материала для исследования в бактериологические лаборатории.
- •§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.
- •§ I. Определение ld50 по методу Рида и Менча. Ld50 - количество микроорганизмов (бактерий, вирусов), вызывающих гибель 50 % зараженных животных.
- •§ 3. Приготовить корпускулярные антигены из культур водного вибриона и кишечной палочки. Для этого:
- •§ 4. Методы иммунизации животных и получения иммунных сывороток:
- •§ 5. Реакция агглютинации:
- •§ I. Разбор методов приготовления 0- и н-антигенов.
- •§ 5. Определение титра агглютинирующей сыворотки. Для опыта необходимо иметь:
- •§ I. Учесть окончательный результат реакции агглютинации и определить титр испытуемой агглютинирующей сыворотки. Результаты опыта отметить в таблице, схема которой дана ниже.
- •§ 5. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:
- •§ 6.Реакция преципитации в агаре.
- •§2. Реакция лизиса.
- •§ 4. Реакция фагоцитоза. Постановка опсоно-фагоцитарной реакции.
- •§5. А)Прямой иммунофлуоресцентный метод.
- •§ I. А). Опыт трансдукции.
- •Часть II. Вирусология
- •§ I. Зарисовать феномен бактериофагии на плотной питательной среде.
- •§ 2. Для титрования бактериофага используются различные методы. Наиболее точным является метод агаровых слоев, предложенный Графа. Сущность этого метода состоит в следующем.
- •§ 3. А). Элементарные тельца (вирионы) вируса оспы (тельца Пашена) в препаратах, окрашенных по Морозову, выглядят в виде мелких точек круглой или удлиненной формы, темно-коричневого цвета.
- •§ 4. Методы заражения животных разнообразны: внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, заражение в мозг и другие.
- •§ 6. С помощью камеры Горяева подсчитают количество клеток в 1 мл. Клетки считают по всей камере под малым увеличением микроскопа . Количество клеток в 1 мл вычисляют по формуле:
- •3. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний
- •3Анятие 3
- •1. Вирусологические:
- •2. Эпидемиологические:
- •§ 3. Для диагностики вирусных гепатитов могут быть использованы методы:
- •Часть III
- •§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на наличие заболевания бруцеллезом у данного больного?
- •§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм сти).
- •§ 2,3. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными 0- и н-сыворотками, принимая во внимание биохимические свойства выделенной культуры. Результаты зарегистрировать в тетрадь.
- •§ 1. Произвести макро- и микроскопическое исследование подозрительных колоний (бесцветные, прозрачные). Посеять подозрительную колонию на скошенный мпа и среды "пестрого ряда".
- •§ 1. Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры кишечной палочки с поливалентными ок-сыворотками:
- •§1. Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.
- •§1. Промикроскопировать готовые препараты-мазки из культуры коклюшной палочки с окраской по Граму и зарисовать.
- •§2. Разбор методов микробиологической диагностики коклюша: бактериологического и серологического. Дифференциация коклюшной и паракоклюшной палочек.
- •§2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.
- •§3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.
- •§7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин ррd-l, вакцина бжп.
- •§1. Произвести учет результатов определения биохимической активности коринебактерий и пробы на токсигенность.
- •§1. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты-мазки риккетсий. По Романовскому-Гимза риккетсии окрашены в красный цвет.
- •§2. Разбор и демонстрация реакции агглютинации с риккетсиозным антигеном (взвесь убитых формалином риккетсий). Результаты реакции зарегистрировать.
§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки мпа и среды Эндо.
При помощи стерильного ватного тампона взять материал со слизистой оболочки носоглотки и произвести посев на простой и кровяной МПА.
§ 10. Объяснить принципы конструирования сред "пестрого ряда"; а также характерные изменения последних, наступающие в результате ферментативной деятельности бактерии. Произвести посев на среды "пестрого ряда" культур кишечной палочки и фекального шелочеобразователя.
Помимо общепринятых сред, в состав "пестрого ряда" нередко включаются среды с другими углеводами, а также среда для определения уреазы - фермента, расщепляющего мочевину. Среда представляет собой мясо-пептонный бульон с добавлением 1-2% мочевины и индикатора фенолового красного. При разложении мочевины образуется аммиак, вызывающий изменение рН среды и соответственно желтой окраски индикатора, на красную.
Рис.1 Латинское морфологическое название бактерий (окраска фуксином)
Рис.2 Колонии пигментных бактерий
Рис.3 Смесь бактерий; окраска по Граму
Контрольные вопросы
Каким требованиям должны удовлетворять питательные среды для выращивания микробов?
Какие виды питательных сред применяются в бактериологической практике?
Что такое агар, и для какой цели он применяется?
Что такое универсальная питательная среда?
Какие сложные (специальные) среды Вы знаете?
Каково назначение элективных (избирательных) питательных сред?
Каково назначение дифференциально-диагностических сред?
По какому принципу сконструированы дифференциальные среды Эндо, Левина, Плоскирева?
Какова оптимальная температура для выращивания патогенных микробов?
Что такое термофилы, психрофилы, мезофилы?
По какому принципу устроены терморегуляторы?
Что такое стерилизация?
Что такое дезинфекция?
Чем отличается стерилизация от дезинфекции?
Какие методы используют для стерилизации?
Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?
Что такое дробная стерилизация?
Когда она применяется?
Что такое пастеризация и тиндализация и в каких случаях они применяются?
Как устроен автоклав?
Какой порядок работы с автоклавом?
Какие методы контроля качества стерилизации вам известны?
Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилизации?
Что такое стерилизация фильтрованием?
Какие изменения происходят в жидких питательных средах при росте бактерий?
Какие признаки колоний имеют дифференциальное значение?
Какие формы колоний вы знаете?
Какой характер имеет консистенция колоний у капсульных бактерий?
Какая поверхность может быть у колоний бактерий?
Почему пигмент у одних видов бактерий окрашивает только колонии, а у других - колонии и питательную среду?
Какие правила необходимо соблюдать при пересеве культуры?
Как следует держать бактериологическую петлю при посеве бактерий на пластинки МПА в чашках Петри и при посеве на косячки?
Как следует держать пробирки с культурой бактерий и питательной средой при посеве бактерий?
Какие методы микробиологической диагностики инфекционных болезней вы знаете?
Какова последовательность исследования смеси бактерий?
Для чего необходимо получить рост изолированных колоний?
Какие методы посева используют для получения изолированных колоний?
Как предупредить загрязнение питательных сред бактериями из воздуха?
Как избежать повреждения плотной питательной среды при посеве бактериальной петлей?
Как производится взятие материала из зева?
Для каких целей производится исследование микрофлоры пальцев и зева?
Какая микрофлора преобладает на кожных покровах человека?
С какой целью получают чистые культуры?
Почему нельзя работать со смешанными культурами?
Какие различия между бактериоскопическим и бактериологическим анализами?
Какие края бывают у колоний бактерий?
Как определить прозрачность "колоний?
Почему для изучения микрофлоры рук используют среду Эндо?
Какие углеводы чаше всего включаются в среды "пестрого ряда"?
Какой цвет имеет углеводная среда с индикатором Андреде в случае ферментации углевода?
Какого цвета углеводная среда с индикатором ВР, если бактерии потребляют углевод? Почему?
Как определяется способность бактерий ферментировать углеводы с образованием газа?
Как определяется индол в среде?
Как определяется уреазная активность бактерий?
Как определить способность бактерий образовывать H2S?
Рис.4 Схема строения автоклава типа АВ-1. Обозначения: 1.Крышка. 2.Стерилизационная камера. 3.Водоуказательная колонка. 4.Мановакууметр. 5.Фильтр. 6.Выпуск конденсата. 7.Электронагреватель. 8.Водопаровая камера. 9.Электроконтактный манометр. 10.Предохранительный клапан. 11.Выпуск пара для создания отрицательного давления.
ЗАНЯТИЕ 6
Дата_____________
Тема: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
План занятия.
1.Регистрация результата пересева культуры бактерий. Макро- и микроскопия выросшей культуры.
2. Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия колоний, выросших на пластинках МПА. Посев колоний на косячки МПА для получения чистых культур.
3.Знакомство с микрофлорой человеческого тела. Регистрация результатов посева отпечатков пальцев и слизи из носоглотки.
4.Ферменты бактерий. Регистрация результатов посева на среды пестрого ряда.
5.Методы культивирования анаэробов. Демонстрация способов удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов. Посев почвы на среды Тароцци и Вильсон-Блэра (в трубки Вейон-Виньяля). Способ Фортнера.
6.Дифференциально-диагностические питательные среды: Плоскирева, Эндо, Левина и др. Посев различных культур бактерий на среды Плоскирева, Эндо и МПА.
Методические указания
§ I. Установить, соответствует ли внешний вид выросшей культуры внешнему виду колонии, из которой был сделан посев (поверхность, пигмент, прозрачность, консистенция культуры). Приготовить из выросшей культуры препарат-мазок, окрасить его фуксином Пфейффера и, установив форму бактерий и характер их взаимоположения. отметить, правильно ли был сделан пересев культуры.
§ 2. Описать внешний вид колоний обоих видов бактерий, выросших на пластинках МПА. Приготовить препараты-мазки из описанных колоний, окрасить их фуксином Пфейффера и определить морфологию бактерии для каждого вида колоний. Одну из колоний пересеять на косячок для получения чистой культуры.
§ 3. Сосчитать количество колоний, выросших на МПА и среде Эндо из посевов отпечатков пальцев, особо обратив внимание на колонии кишечной палочки на среде Эндо. Промикроскопировать при окраске по Граму несколько колоний со среды Эндо и МПА.
Промикроскопировать колонии, выросшие при посеве слизи из носоглотки (окраска по Граму). Результаты работы оформить в виде протокола.
Протокол исследования микрофлоры пальцев рук.
|
Среда |
Число выросших колоний |
|
МПА |
|
|
Эндо (колонии кишечной палочки) |
|
Протокол исследования выросшей микрофлоры слизистой оболочки носоглотки.
|
|
Морфологические названия бактерий и их отношение к окраске по Граму |
|
На МПА |
|
|
На кровяном МПА |
|
Протокол исследования колонии.
1.Размер колонии_______________________________________
2.Форма колонии_______________________________________
3. Поверхность колонии_________________________________
4. Края колонии________________________________________
5.Прозрачность колоний_________________________________
6.Пигмент_____________________________________________
7.Консистенция________________________________________
8.Форма бактерий______________________________________
9. Взаиморасположение бактерий_________________________
10.Латинское морфологическое название бактерий__________