- •Часть I
- •§ I. А) Оборудование рабочего места.
- •§ 7. Метод люминесцентной микроскопии.
- •§ I. Устройство электронного микроскопа.
- •§2. Методы электронно-микроскопического препарирования.
- •§3. Методы получения ультратонких срезов
- •§ 4. Демонстрация ультратонких срезов бактериальных клеток в электронном микроскопе.
- •§ 5. Описание метода микроскопии в темном поле см. В методических указаниях к 4 практическому занятию.
- •§ 2. Посмотреть под микроскопом препарат-мазок из культуры бактерий, имеющих жгутики, и зарисовать. Препарат окрашен по методу Бениньетти.
- •§ 3. Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.
- •§ 4. Окраска зерен волютина по Нейссеру.
- •§ 5. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса.
- •§ 3. Метод микроскопии в темном поле.
- •§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.
- •3Анятие 5
- •§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки мпа и среды Эндо.
- •§ 4. Результаты посева на среды пестрого ряда зарегистрировать в таблице.
- •§ 5. Приготовить взвесь почвы в Физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Тароцци.
- •§ 4. А) Определение дифтерийного экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
- •§ 7. Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
- •§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном мпа. Зарисовать картину гемолиза.
- •§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пересылки материала для исследования в бактериологические лаборатории.
- •§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.
- •§ I. Определение ld50 по методу Рида и Менча. Ld50 - количество микроорганизмов (бактерий, вирусов), вызывающих гибель 50 % зараженных животных.
- •§ 3. Приготовить корпускулярные антигены из культур водного вибриона и кишечной палочки. Для этого:
- •§ 4. Методы иммунизации животных и получения иммунных сывороток:
- •§ 5. Реакция агглютинации:
- •§ I. Разбор методов приготовления 0- и н-антигенов.
- •§ 5. Определение титра агглютинирующей сыворотки. Для опыта необходимо иметь:
- •§ I. Учесть окончательный результат реакции агглютинации и определить титр испытуемой агглютинирующей сыворотки. Результаты опыта отметить в таблице, схема которой дана ниже.
- •§ 5. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:
- •§ 6.Реакция преципитации в агаре.
- •§2. Реакция лизиса.
- •§ 4. Реакция фагоцитоза. Постановка опсоно-фагоцитарной реакции.
- •§5. А)Прямой иммунофлуоресцентный метод.
- •§ I. А). Опыт трансдукции.
- •Часть II. Вирусология
- •§ I. Зарисовать феномен бактериофагии на плотной питательной среде.
- •§ 2. Для титрования бактериофага используются различные методы. Наиболее точным является метод агаровых слоев, предложенный Графа. Сущность этого метода состоит в следующем.
- •§ 3. А). Элементарные тельца (вирионы) вируса оспы (тельца Пашена) в препаратах, окрашенных по Морозову, выглядят в виде мелких точек круглой или удлиненной формы, темно-коричневого цвета.
- •§ 4. Методы заражения животных разнообразны: внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, заражение в мозг и другие.
- •§ 6. С помощью камеры Горяева подсчитают количество клеток в 1 мл. Клетки считают по всей камере под малым увеличением микроскопа . Количество клеток в 1 мл вычисляют по формуле:
- •3. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний
- •3Анятие 3
- •1. Вирусологические:
- •2. Эпидемиологические:
- •§ 3. Для диагностики вирусных гепатитов могут быть использованы методы:
- •Часть III
- •§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на наличие заболевания бруцеллезом у данного больного?
- •§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм сти).
- •§ 2,3. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными 0- и н-сыворотками, принимая во внимание биохимические свойства выделенной культуры. Результаты зарегистрировать в тетрадь.
- •§ 1. Произвести макро- и микроскопическое исследование подозрительных колоний (бесцветные, прозрачные). Посеять подозрительную колонию на скошенный мпа и среды "пестрого ряда".
- •§ 1. Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры кишечной палочки с поливалентными ок-сыворотками:
- •§1. Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.
- •§1. Промикроскопировать готовые препараты-мазки из культуры коклюшной палочки с окраской по Граму и зарисовать.
- •§2. Разбор методов микробиологической диагностики коклюша: бактериологического и серологического. Дифференциация коклюшной и паракоклюшной палочек.
- •§2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.
- •§3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.
- •§7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин ррd-l, вакцина бжп.
- •§1. Произвести учет результатов определения биохимической активности коринебактерий и пробы на токсигенность.
- •§1. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты-мазки риккетсий. По Романовскому-Гимза риккетсии окрашены в красный цвет.
- •§2. Разбор и демонстрация реакции агглютинации с риккетсиозным антигеном (взвесь убитых формалином риккетсий). Результаты реакции зарегистрировать.
§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.
Для опыта необходимо иметь:
1.Раствор яичного белка в разведении 1:25.
2.Культуру M. lysodeikticus на косячке МПА.
3.Физиологический раствор во флаконе.
4.Пипетки емкостью в I и 5 мл.
5.Две агглютинационные пробирки.
Порядок работы
1.Пометить карандашом по стеклу опытную и контрольную пробирки.
2.В контрольную пробирку налить I мл физиологического раствора.
3.В опытную пробирку налить I мл раствора яичного белка в исодном разведении.
4.Приготовить бактериальную взвесь, для чего в пробирку скультурой М. M. lysodeikticus внести 5 мл физиологического раствора и, вращая пробирку между ладонями, смыть культуру.
5.В опытную и контрольную пробирки добавить по I мл полученной бактериальной взвеси и поставить пробирки в термостат на 1 час при 370.
6.Через час зарегистрировать результаты опыта, отмечая полное растворение микробов+ + + +, частичное + + и отсутствие лизиса знаком —.
Определение гемотоксина (на МПА с кровью).
Рис.1 Золотистый стафилококк
Рис.2 Эпидермальный стафилококк
Протокол вскрытия мыши.
1. Внешний осмотр_____________________________________
2. Состояние подкожной клетчатки________________________
3. Состояние лимфатических узлов________________________
4. Грудная полость______________________________________
а) легкие_____________________________________________
б) сердце_____________________________________________
в) медиастинальные лимфатические узлы_________________
5. Брюшная полость_____________________________________
а) печень______________________________________________
б) селезенка__________________________________________
в) почки с надпочечниками______________________________
6. Примечание_________________________________________
Рис.3 Препарат – оттиск из органов мыши; окраска по Ионэ
Рис.4 Фагоцитоз гонококков. Окраска___________
Регистрация опыта с лизоцимом.
|
Пробирки |
Компоненты |
Результаты | |||
|
Физиологический раствор |
Взвесь бактерий |
Яичный белок в разведении 1:25 | |||
|
Контроль |
1 мл |
1 мл |
— |
| |
|
Опыт |
— |
1 мл |
1 мл |
| |
Контрольные вопросы
Какие правила необходимо соблюдать при взятии и пересылке материала для бактериологического исследования?
Что такое бактериемия?
Что такое септицемия (сепсис)?
Что такое септикопиемия?
В чем заключается подготовка погибшего животного к вскрытию?
Какие условия необходимо соблюдать при вскрытии заразного трупа?
В каком порядке производится вскрытие и исследование трупов животных?
Какой материал чаще всего берется для бактериологического исследования?
Как производится взятие крови из трупа животного?
Как производится взятие материала для посевов из органов трупа животного?
Что такое иммунитет?
Какие виды иммунитета в отношении инфекционных болезней вы знаете?
Каковы анатомо-физиологические механизмы естественной резистентности?
Каковы основные направления в развитии современной иммунологии?
Какие клетки обладают фагоцитарной активностью?
Какое различие между завершенным и незавершенным фагоцитозом?
Из каких фаз состоит фагоцитарный процесс?
Кто является создателем фагоцитарной теории иммунитета?
Как фиксируются препараты-мазки для изучения фагоцитоза?
Что такое лизоцим, какова его химическая природа?
Где содержится лизоцим в организме человека?
В чем проявляется действие лизоцима на бактерии?
Как ставится опыт для изучения действия лизоцима на бактерии?
Приложение к занятию 8
Иммунитет - это способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих на себе признаки генетически чужеродной информации.
Рис.5 Схема вскрытия животного
ЗАНЯТИЕ 9
Дата___________________
Тема: ИНФЕКЦИЯ. ИММУНИТЕТ. АНТИГЕНЫ, АНТИТЕЛА, РЕАКЩИ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ
План занятий
1. Методы определения вирулентности микроорганизмов. Определение LD 50 по методу Рида и Менча.
2. Исследование культуры, выросшей из крови и органов мыши, вскрытой на предыдущем занятии.
3. Антигены. Виды антигенов: корпускулярные, растворимые. Токсины, анатоксины. Приготовление антигенов.
4. Антитела. Иммунные сыворотки. Получение иммунных сывороток.
5.Реакции иммунной сыворотки. Реакция агглютинации: а) на стекле;
б) в пробирке.
Методические указания