§5. А)Прямой иммунофлуоресцентный метод.

Приготовить на предметном стекле из исследуемой культуры бактерий тонкий мазок (в густом мазке не удается отметить свечение отдельных клеток). Границы мазка отметить с тыльной стороны восковым карандашом. Подсушить препарат на воздухе и погрузить его в стакан­чик с 96° этиловым спиртом для фиксирования на 15 минут, а затем вновь подсушить на воздухе. После этого нанести на мазок каплю люминесцирующей сыворотки в рабочем разведении. (Рабочее разведение сухих люминесцирующих сывороток указано на этикетке ампулы). Препарат обрабатывается сывороткой в течение 15-20 минут при комнатной температуре. По окончании окраски каплю сыворотки стряхивают, а препарат промывают в течение 10 минут проточной водопроводной во­дой, затем подсушивают на воздухе и наносят на него каплю разведенного глицерина (9 частей глицерина +1 часть физиологического раст­вора) . Накрывают препарат покровным стеклом, избыток жидкости уда­ляют фильтровальной бумагой.

микроскопию производят в люминесцентном микроскопе. При этом используют специальное нефлуоресцирующее иммерсионное масло.

При наличии в исследуемом материале бактерий, по отношению к которым люминесцирующая сыворотка содержит антитела, на темном фоне препарата обнаруживается специфическое яркое желто-зеленое свечение по периферии бактериальных клеток. Посторонние бактерии не светятся.

Для оценки интенсивности специфического свечения используют четырехкрестовую систему:

++++ сверкающая флуоресценция желтовато-зеленого цвета с четко выраженной формой клеток;

+++ яркая флуоресценция желто-зеленого цвета;

++ и + заметная, но слабо выраженная флуоресценция.

Положительным результатом считается флуоресценция, оценивае­мая

на ++++ и +++.

Иммунофлуоресцентный метод является методом ускоренной ориентировочной диагностики и должен сопровождаться полным бактериологическим исследованием.

б)Непрямой иммунофлуоресцентный метод предусматривает использование единой флуоресцирующей сыворотки - антиглобулиновой, содержащей антитела против кроличьих глобулинов. Как правило, диагностические специфические сыворотки являются кроличьими, поэтому флуоресцирующая антиглобулиновая сыворотка реагирует с любыми специфическими антителами (кроличьими глобулинами), которые при этом играют роль антигенов. Кроличьи глобулины (специфические антитела) связываются с гомологичными антигенами. На образовавшихся комплексах фиксируются флуоресцирующие антиглобулиновые антитела и вызывают их свечение в люминесцентном микроскопе.

Контрольные вопросы

В чем состоит принцип пассивной гемагтлютинации?

Какие преимущества имеет РПГА?

Какие компоненты участвуют в РПГА?

Что такое сенсибилизированные эритроциты?

Как определяют результаты РПГА?

Какова методика постановки реакции пассивной гемагглютинации?

Что такое комплемент?

Какую роль играет комплемент в реакциях иммунной сыворотки?

Как получают гемолитическую сыворотку?

Какова методика постановки реакции гемолиза?

Будет ли инактивированная (при 56° в течение 30 минут) гемоли­тическая сыворотка лизировать эритроциты?

Что такое гемолитическая (индикаторная) система?

Если конечным результатом РСК является гемолиз - реакция положительная или отрицательная?

Какие компоненты участвуют в РСК?

Для чего необходимо определение рабочих доз антигена и компле­мента?

Как определяют рабочую дозу комплемента?

Почему испытуемая сыворотка должна быть инактивирована?

Как ставят основной опыт РСК?

Если в сыворотке больного отсутствуют антитела к антигену, ка­ким будет результат РСК?

Что называется титром гемолитической сыворотки?

В каком разведении берется в основной опыт гемолитическая сы­воротка?

Какие контроли используются в РСК?

Что такое бактериотропины и опсонины?

Что такое фагоцитарное число?

Что такое опсонический индекс?

Как определяют фагоцитарное число и опсонический индекс?

Каковы преимущества и недостатки иммунофлуоресцентного метода?

Почему препараты-мазки при этом методе исследования не должны быть слишком густые?

В чем состоит сущность иммунофлуоресцентного метода исследования?

Каково различие между прямым и непрямым методами иммунофлуоресцентного исследования?

Какова классификация форм приобретенного иммунитета?

Каковы различия между искусственным активно и искусственным пассивно приобретенным иммунитетом?

Какой иммунитет создается при введении гамма-глобулина?

Какие сведения должны быть на этикетках иммунопрепаратов?

Какие условия хранения иммунопрепаратов?

Как получают химические вакцины?

Какое преимущество имеют сорбированные вакцины и анатоксины перед нативными?

Как готовят анатоксины?

Как получают лечебно-профилактические сыворотки?

Как производят очистку лечебно-профилактических сывороток?

Какие преимущества имеет гамма-глобулин перед сыворотками?

В каких единицах дозируются антитоксические сыворотки?

В каких единицах дозируются анатоксины?

Каковы методы введения аллергенов?

Какие осложнения могут возникнуть при введении лечебно-профи­лактических сывороток?

Как предупреждают возможность развития анафилактического шока при введении сывороток?

Как определяют пригодность для использования иммунопрепарата?

Каковы способы введения вакцин?

Как готовят аутовакцины, каково их назначение?

Приложение к занятию 12

Серологические реакции, используемые с диагностической целью

1. Классическая реакция агглютинации с бактериальными антигенами (развернутая и на стекле).

2.Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее варианты (рНАг, рНАт).

3.Реакция Кумбса (для выявления неполных антител).

4.Реакция коагглютинации.

5.Реакция латекс-агглютинации.

6.Реакция агрегат-гемагглютинации.

7.Реакция иммунофлуоресцентного метода (прямого и непрямого).

8.Реакция связывания комплемента (РСК).

9.Реакция преципитации (в жидкой среде и в геле). 10. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР).

11. Реакции иммуноферментного метода (ИФМ).

12. Реакции радиоиммунного метода (РИМ).

При некоторых заболеваниях используются различные модификации этих методов.

С помощью этих реакций можно определять как наличие в исследуемом материале антигенов, так и антител к ним.

Реакция лизиса эритроцитов (гемолиза) осуществляется в определенной последовательности:

1) эритроциты (Э)+антитело (А) - образуется комплекс ЭА;

2)к комплексу ЭА присоединяются компоненты комплемента С1С4 в присутствии ионов Са⁺⁺ и температуре ниже 37⁰, образуется комплекс ЭА С1С4;

3) к комплексу ЭАС1С4 присоединяется компонент С2 в присутствии ионов Mg при 37⁰, образуется комплекс ЭА С1С4С2;

4)к комплексу ЭА С1С4С2 присоединяется компонент C3 при 37⁰ образуется комплекс ЭА С1С4С2СЗ;

5) к комплексу ЭА С1С4С2СЗ присоединяются компоненты С5, С6. а затем С7, С8, С9. После присоединения компонента С9 происходит гемолиз.

Схематически формула этой реакции такова:

1. Э+А ЭА

Ca⁺⁺

2. ЭА+С1С4 ЭА С1С4;

Mg⁺⁺ 37⁰

3. ЭА С1С4+С2 ЭА С1С4С2;

4. ЭА С1С4С2+С3 ЭА С1С4С2С3

5. ЭА С1С4С2С3+С5С6 ЭА С1С4С2С3С5С6

6. ЭА С1С4С2С3С5С6+С7С8С9

ЭА С1С4С2С3С5С6С7С8С9 гемолиз.

Система комплемента и ее основные функции

Комплемент - большая группа взаимодействующих между собой белков и гликопротеинов крови, имеющихся у всех позвоночных (белки С1-С9, различные факторы и инактиваторы, всего около 20 компонентов).

Существует три пути активации системы комплемента:

а)Классический, инициируемый комплексом антиген-антитело;

б)Альтернативный, инициируемый бактериальными эндотоксинами, пропердином и различными другими агентами, но протекающий без учас­тия компонентов С1, С4 и С2;

в)Механизм С1 -шунта, реализуется при дефиците С4-комлонента, требует активации С1-компонента.

Основные функции системы комплемента:

1.Лизис чужеродных клеток, включая бактерий.

2.Опсонизация чужеродных клеток, включая бактерий. Они становятся более доступными для макрофагов, благодаря феномену иммунного прилипания (он обусловлен прилипанием к клеткам СЗв и в меньшей степени С4в, С5в, С3вi ; С2 компонентов и их фрагментов).

3.Стимуляция хемотаксиса (С5а, в меньшей степени СЗа, фрагмент Ва, комплекс С5в67).

4.Стимуляция фагоцитоза (благодаря присоединению к иммунному комплексу С1q или СЗв).

5.Повышение сосудистой проницаемости и усиление лейкоцитоза (С5а, СЗе).

6.Стимуляция внутриклеточных процессов анафилотоксинами С5а, СЗа, в результате которой из мастоцитов выбрасываются биологически активные соединения (гистамин, брадикинин, серотонин, лейкотриены и т.п.), обусловливающие развитие воспаления.

Компоненты и регуляторы комплемента могут быть синтезированы самими иммунекомпетентными клетками.

Макрофаги синтезируют белки С1q , С2, СЗ, С4, С5, факторы В,Д, Р, ингибиторы - фактор 1, Н, С1 -инактиватор (гены С2, С4 и фактора В связаны с системой MHC).

Реакция Кумбса

При помощи реакций прямой и пассивной агглютинации определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами, так как, соединяясь с анти­геном, блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигена в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют специальную реакцию Кумбса. В реакции участвуют: а) сыворотка больного, в которой определяют неполные антитела; б) антиген-диагностикум; в) антиглобулиновая сыворотка - антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в два этапа: 1) взаимодействие антигена с не­полными антителами; 2) взаимодействие антиглобулиновой сыворотки (антиглобулиновых антител) с антителами, адсобрированными на анти­гене. В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают два одновалентных антитела, адсорбированных соответствен­но на двух антигенах, что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Перечень обязательных сведений, которые должны быть на этикет­ках лечебно-профилактических препаратов:

а)полное наименование препарата;

б)номер государственного контроля;

в)номер серии препарата;

г)срок годности;

д)дозировка.

Рис.5 Антиглобулиновая проба Кумбса для выявления неполных (моновалентных) антител.

Первый этап (1) – соединение моновалентных антител с антигенами (без агглютинации).

Второй этап (2) – добавление антиглобулиновой сыворотки приводит к агглютинации антигенов, покрытых моновалентным антителами.

Рис.6 Схема прямого (1) и непрямого (2) иммунофлуоресцентного метода.

Вакцины по состоянию входящих в них антигенов делят на:

1) живые (БЦЖ, туляремийная, бруцеллезная, сыпнотифозная, сибиреязвенная, гриппозная, коревая, полиомиелитная и т.д.);

2) убитые (против кишечных инфекций, лептоспирозов, коклюша и т. д. );

3) химические, в состав которых входят полные антигены (хими­ческая сорбированная брюшнотифозная).

По количеству входящих в них антигенов вакцины делят на: моновакцины, дивакцины, тривакцины, поливакцины.

Ассоциированные (комбинированные) вакцины представляют собой комплексные препараты из различных вакцин (и анатоксинов).

Анатоксины получают, добавляя к нативному экзотоксину 0,5% формалина. Смесь выдерживают в течение 3-4 недель при 38-40° . Анатоксин применяют для создания активного антитоксического иммуните­та. Концентрация анатоксина выражается в иммуногенных единицах (ИЕ) или в единицах связывания (ЕС). Одна ИЕ или ЕС- это то коли­чество анатоксина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей (АЕ) сыворотки дает инициальную флокуляцию.

Иммунные сыворотки делят на лечебно-профилактические и диагностические .

Для получения лечебно-профилактических сывороток иммунизируют крупных животных - лошадей, баранов, мулов, волов.

Для получения диагностических сывороток используют кроликов.

Лечебно-профилактические сыворотки делят на:

а) антибактериальные и

6) антитоксические

Антибактериальные сыворотки дозируются в миллилитрах (мл).

Антитоксические сыворотки дозируются в международных антитоксических единицах - МБ. Одна МЕ - количество сыврротки, нейтрализующее определенное количество доз токсина для животных определенного вида и веса. Количество МЕ сыворотки в I мл является ее титром. Титрование антитоксических сывороток проводят на животных и ин витро в реакции флокуляции.

Лечебно-профилактические сыворотки подвергаются очистке от балластных белков методом ферментативного гидролиза и последующего диализа (сыворотки-"Диаферм"). Эти сыворотки используют также для получения чистого концентрированного иммунного гаммаглобулина.

Основные свойства макрофагов

Функциональная активность макрофагов, посредством которой они оказывают решающее воздействие на течение защитных реакций, может быть разделена на следующие четыре типа:

1. Хемотаксис.

2. Фагоцитоз.

3. Секреция биологически активных соединений.

4. Обработка и представление клеткам иммуной системы, принимающим участие в кооперативном иммунном ответе, процессированного антигена.

Важнейшим следствием макрофагального фагоцитоза является сти­муляция секреторной активности макрофагов. Активированные макрофа­ги синтезируют и секретируют широчайший набор биологически активных соединений (более 50) и в этом смысле не имеют себе разных среди других типов клеток организма. Особый интерес представляет синтез и секреция простагландинов (ПГ), которые, с одной стороны, являются медиаторами воспаления и иммунного ответа, а с другой стороны, контролируют эффективность фагоцитоза, секреции и цитотоксической ак­тивности самих макрофагов. Фагоцитоз стимулирует секрецию макрофа­гами ПГ разных типов: ПГЕ₁, ПГЕ₂ , ПГД₂, ПГФ₂ и пр. Возможно, что синтез и секреция ПГ во время фагоцитоза обеспечивает как положи­тельную, так и отрицательную связь и таким образом достигается тон­кая саморегуляция фагоцитарной активности.

Важным секреторным продуктом макрофагов являются активные формы кислорода (супероксидный анион 0₂ , перекись водорода Н₂О₂ и и др.) образующиеся в результате "окислительного взрыва", которые играют ключевую роль в уничтожении фагоцитированных микробов. Макрофаги синтезируют также некоторые компоненты системы комплемента.

Активация макрофагов - основная часть иммунного ответа организма при различных инфекционных процессах. Она представляет собой се­рию структурных и биохимических изменений, в результате которых макрофаг становится способным осуществлять свои защитные функции. Условно различают два пути стимулирования макрофагов, один опосре­дуется факторами иммунного ответа - иммуноглобулинами, лимфокинами, комплементом, другой - микробными и другими стимулами. Макрофаги не сразу достигают полной активации, при которой максимально мобилизуются их цитопатогенные свойства. Вначале моноциты крови рекрутируются в зону воспаления, где они приобретают готовность к цитотоксической реакции. Такие макрофаги принято называть примированными. В качестве примирующих факторов достаточно эффективны интерфероны α иβ, лимфокины. Примированные макрофаги готовы, но еще не реализуют цитопатический эффект. Для реализации последнего необходимо действие стимулирующих агентов – интерферона γ, других лимфокинов, липополисахаридов и прочих стимуляторов. Активация макрофагов опосредуется с помощью имеющихся в их плазматической мембране большого количества соответствующих рецепторов для стимуляторов. После стимуляции макрофаги увеличиваются в размерах, обогащаются лизосомами, возрастает адгезия их наружных

Краткая общая схема иммунного ответа и кооперативного взаимодействия макрофагов, Т- и В - лимфоцитов

1. Антиген поглощается макрофагом.

2.Макрофаг осуществляет процессинг антигена и

3.Представляет процеосированный антиген на своей поверхности Т- и В - лимфоцитам.

4. Т -хелпер узнает антиген и, в свою очередь, активируется (синтезирует факторы роста и дифференцировки для В-лимфоцитов.)

5.В-лимфоцит также распознает и несет процессированный анти­ген и активируется, в. том числе и сигналами Т-хелпера.

6. Активированные В-лимфоциты пролиферируют и дифференцируются в антителообразующие клетки и клетки памяти (активированные Т-лимфоциты также дают клон клеток памяти - из одной клетки образуется около 1000 клеток клона памяти).

7. Антитела связываются с антигеном, маркируют его таким образом для узнавания другими компонентами иммунной системы, включая системы комплемента и макрофагов, которые и уничтожают микробную клетку.

8. Особенность противовирусного иммунитета: Т-киллеры убивают клетку хозяина, инфицированную вирусом, и уничтожают ее вместе с вирусом.

Распознаванию вирусных антигенов в инфицированной клетке способствуют антигены MHC класса I.

Главная система гистосовместимости (Major Histocompatability Complex - MHC) у человека - система HLA - антигенов (Human Leucocyte Antigen System), с нею связаны следующие функции: 1) Интенсивное отторжение аллотрансплантатов ткани.

2) Стимуляция образования антител.

3) Стимуляция реакции в смешанной культуре лимфоцитов (бласттрансформации).

4) Реакция "трансплантат против хозяина".

5) Клеточная реакция лимфолиза.

6) Контроль силы иммунного ответа (гены Immune response - Ir ).

7)Рестрикция (ограничение) иммунного ответа.

8) Контроль синтеза некоторых компонентов системы комплемента.

Система МНС у человека (НLA) включает 7 генетических локусов. Основные среди них - локусы А,В,С.

Локус

1.HLA -А

2.HLA -В Контролируют синтез антигенов МНС класса I (основные

3.НLA -С трансплантационные антигены)

4.HLA - ДR

5.HLA –ДQ Контролируют синтез антигенов МНС класса П (Iа - антигены)

6.HLA –ДP

7.Локус, отвечающий за синтез некоторых факторов системы компле­мента (С2,С4,В) - антигены МНС класса III (встречаются только в сыворотке)

Кроме того, с системой HLA сцеплен локус Iг, контролирующий силу иммунного ответа.

Структура антигенов МНС

Антигены класса I состоят из двух цепей:

а)тяжелая цепь - гликопротеин,

м.м. 45 кДа, выступает над мембраной;

б)легкая цепь - β - микроглобулин:, м.м. 11.6 кДа, закодирован вне МНС.

Антигены МНС класса I имеют почти все клетки, но с разной степенью экспрессии. Играют важную роль в трансплантационном иммунитете, а также в распознавании Т-киллерами клеток, зараженных вирусом. Антигены класса II (Iа - антигены) также состоят из двух цепей:

α- цепь - гликопротеин, м.м. 35 кДв

β - цепь - гликопротеин, м.м. 25 кДа

Антигены МНС класса II имеют макрофаги, Т- и В-лимфоциты, клетки Лангерганса, дендритные клетки и, возможно, другие.

Значение антигенов класса П.

Т- хелперы и Т-супрессоры распознают чужеродные антигены в ассоциации с антигенами класса П, которые находятся на поверхности клеток, вовлеченных в иммунный ответ (Т- и В-лимфоциты, макрофаги и др.).

Таким образом, белки МНС класса П играют важную роль в повы­шении эффективности иммунного ответа.

Классификация и свойства интерферонов

В организме существует три антигенно различных типа молекул интерферона: α-,β-, и γ- интерфероны, которые различаются по физико-химическим свойствам, биологии действия и оказывают разнообразное влияние на многочисленные функции клеток и тканей. Существует два вида рецепторов для различных интерферонов: один для α- и β-интер­феронов (рецепторы 1-го типа), другой - для γ -интерферона (рецеп­торы П-го типа).

Интерферон - альфа (IFN-α) - лейкоцитарный, стабилен при рН 2,0; взаимодействует с рецепторами 1-го типа.

Интерферон-бета (IFN- β) - фибробластный, стабилен при рН 2,0; взаимодействует с рецепторами 1-го типа.

Интерферон-гамма (IFN-γ ) - иммунный (лимфоцитарный), нестабилен при рН 2,0; взаимодействует с рецепторами П-го типа.

Основные свойства интерферонов:

противовирусное, иммуномодулирующее, противоопухолевое, противобактериальное (бактерицидное и бактериостатическое).

Контрольные вопросы по иммунологии

Что такое иммунитет?

Какие субпопуляции Т-лимфоцитов Вы знаете?

Что такое антитела?

Какие клетки относят к системе макрофагов?

Что такое лимфокины и какие функции они выполняют?

Какова химическая природа рецепторов, с помощью которых В-лимфоциты распознают антигены?

На какие классы делятся иммуноглобулины и по какому признаку?

Какие субпопуляции В-лимфоцитов Вы знаете?

Какие формы иммунного ответа Вы знаете?

Что такое антигены и какими свойствами они обладают?

Каковы основные функции макрофагов?

Чем отличаются экзотоксины от эндотоксинов и каковы основные свойства тех и других?

Какова главная функция иммунной системы?

Что такое трансплантационный иммунитет и какими клетками иммун­ной системы он опосредуется?

Какие два типа гиперчувствительности Вы знаете?

Как устроена молекула иммуноглобулина (антитела)?

Как происходит дифференцировка Т- и В-лимфоцитов и их предшест­венников?

В чем заключается сущность иммуноферментного метода (ИФМ) диагностики инфекционных болезней?

Каким клеткам представляет макрофаг процессированный (перера­ботанный ) антиген?

Чем отличается первичный иммунный ответ от вторичного?

Как ставится и оценивается реакция связывания комплемента?

Кто является творцом фагоцитарной теории иммунитета?

Каковы особенности генетического контроля биосинтеза антител? Какие гены контролируют синтез вариабельных участков легкой и тяже­лой полипептидных цепей?

Какой механизм лежит в основе формирования генов вариабельных участков легкой и тяжелой полипептидных цепей?

Какие препараты применяются для создания искусственного актив­ного иммунитета?

Что такое анатоксины, как их получают и для какой цели они при­меняются?

С какой целью применяются аллергические пробы?

Что такое комплемент, какую роль он играет и из каких компонен­тов он состоит?

Какие пути активации системы комплемента Вы знаете?

Что такое тимус и какова его роль в иммунитете?

Как формируются клетки иммунной памяти, обеспечивающие продол­жительность приобретенного иммунитета?

Что собой представляет реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и для каких целей она применяется?

Чем отличается гиперчувствительность немедленного типа от гиперчувствительности замедленного типа?

Что такое анафилаксия, в каких случаях она развивается и чем она опосредуется?

В чем состоит сущность радиоиммунного метода диагностики инфекционных болезней?

Какие центральные и периферические органы иммунитета Вы знаете?

Из каких фаз складывается процесс фагоцитоза?

Какие клетки являются главными действующими лицами иммунитета?

Какие формы иммунитета Вы знаете?

Какие механизмы лежат в основе противовирусного иммунитета?

Какими иммуноглобулинами (антителами какого класса) опосредуется гиперчувствительность немедленного типа?

Что собой представляет реакция агглютинации и каково ее практическое использование?

Какие варианты реакций, агглютинации применяются в качестве экспресс-методов диагностики инфекционных болезней?

Какие Т-лимфоциты обеспечивают главным образом защиту организма от вирусов и как они распознают клетки, пораженные вирусом?

Что такое завершенный и незавершенный фагоцитоз?

Иммуноглобулины какого класса обеспечивают местный иммунитет?

Какие факторы иммунитета обусловливают лизис бактериальной клетки или бактерицидный эффект?

Какими клетками иммунной системы опосредуются реакции гиперчувствительности замедленного типа?

Что представляет собой реакция преципитации и для каких целей она применяется?

Каким образом формируется естественный и искусственный пассивный иммунитет?

Что такое интерферон и какие типы его знаете, какими свойства­ми он обладает?

Какая разница между активным и пассивным иммунитетом и какие формы их Вы знаете?

Чем отличаются полноценные антигены от неполноценных?

Какие серологические реакции применяются для диагностики инфек­ционных заболеваний?

Что такое лимфокины и какую роль они играют в развитии иммун­ного ответа?

Какими свойствами обладают интерфероны и каково их практическое применение?

Какова антигенная структура бактериальной клетки, основные ви­ды ее антигенов?

В чем заключается сущность иммунологической толерантности,какие клетки опосредуют эту форму иммунного ответа?

Чем обеспечивается врожденный (наследственный) иммунитет?

Какие механизмы лежат в его основе?

Какие клетки иммунной системы отвечают за формирование гумо­рального иммунитета?

Для чего необходимо знать антигенное строение бактериальной клетки?

Какова роль макрофагов в иммунитете?

Какие структуры молекулы иммуноглобулина определяют специфич­ность антител?

Генами какой системы человека контролируется синтез его трансплантационных антигенов?

Для создания искусственного активного или пассивного иммуни­тета применяются лечебные гаммаглобулины и почему? Какой механизм бактерицидного действия макрофагов? Зависит ли он от продуктов окислительного взрыва или от действия ферментов лизосом?

Какие клетки иммунной системы отвечают за формирование клеточ­ного иммунитета?

Вы поставили реакцию связывания комплемента. Ее конечный результат - гемолиз. Как, по Вашему мнению, реакция в данном случав положительная или отрицательная?

Что таков неполные антитела и как они обнаруживаются?

Какая разница между 0- и Н-агглютинацией?

Какую роль играют Т-киллеры в реакциях иммунитета?

Как стимулируют дафференцировку В-лимфоцитов Т-лимфоциты, какие продукты последние вырабатывают и что они вызывают у В-лимфоцитов?

Какую функцию выполняют Т-хелперы (Т-регуляторы)?

Какую роль играют Т-супрессоры в иммунитете?

Что такое системы МНС и синтез каких антигенов человека она контролирует?

Какие основные локусы системы МНС у человека Вы знаете?

Для каких целей применяются агглютинирующие сыворотки, какая разница между видовыми и типоспецифическими сыворотками?

Каковы основные свойства антител?

Каким образом В-лимфоциты распознают соответствующие антигены?

Каким образом тимус осуществляет дифференцировку Т-лимфоцитов?

Каким образом антитела распознают соответствующие антигены?

Какие антитела появляются в первую очередь при первичном иммун­ном ответе?

Каким образом мать обеспечивает формирование у ребенка пассив­ного естественного иммунитета?

Каким образом костный мозг (у птиц сумка Фабрициуса) определяют дифференцировку В-лимфоцитов?

Каким образом оценивают результаты развернутой пробирочной

агглютинации?

Каким образом В-лимфоциты превращаются в антителообразующие клетки? Как происходит созревание В-лимфоцитов?

Какая серологическая реакция является универсальной и может быть использована практически для диагностики любого инфекционного заболевания?

Каким образом Т-хелперы управляют дифференцировкой и скоростью размножения В-лимфоцитов?

Какое количество вариантов антител, различающихся по своей спе­цифичности, может синтезировать организм человека?

Что такое клон лимфоцитов, чем характеризуются клетки одного и того же клона? Как они возникают? .

Какие основные функции выполняет система комплемента?

ЗАНЯТИЕ 13

Дата_________________

Тема: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ

План занятия

1. Типы и механизмы генетических рекомбинаций: трансформация, трансдукция, конъюгация (разбор схем).

а)Опыт трансдукции (разбор и демонстрация)

б)Постановка опыта конъюгации.

2.Плазмиды бактерий. Классы и свойства R-плазмиды.

3.Молекулярные механизмы мутаций у бактерий (разбор).

4.Получение рекомбинантных молекул ДНК (разбор).

Методические указания