- •Часть I
- •§ I. А) Оборудование рабочего места.
- •§ 7. Метод люминесцентной микроскопии.
- •§ I. Устройство электронного микроскопа.
- •§2. Методы электронно-микроскопического препарирования.
- •§3. Методы получения ультратонких срезов
- •§ 4. Демонстрация ультратонких срезов бактериальных клеток в электронном микроскопе.
- •§ 5. Описание метода микроскопии в темном поле см. В методических указаниях к 4 практическому занятию.
- •§ 2. Посмотреть под микроскопом препарат-мазок из культуры бактерий, имеющих жгутики, и зарисовать. Препарат окрашен по методу Бениньетти.
- •§ 3. Окраска по Граму (в модификации Синева) производят следующим образом. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.
- •§ 4. Окраска зерен волютина по Нейссеру.
- •§ 5. Окраска капсул по методу Бурри-Гинса.
- •§ 3. Метод микроскопии в темном поле.
- •§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.
- •3Анятие 5
- •§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки мпа и среды Эндо.
- •§ 4. Результаты посева на среды пестрого ряда зарегистрировать в таблице.
- •§ 5. Приготовить взвесь почвы в Физиологическом растворе. С помощью пастеровской пипетки засеять 1-2 капли взвеси на среду Тароцци.
- •§ 4. А) Определение дифтерийного экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
- •§ 7. Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
- •§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном мпа. Зарисовать картину гемолиза.
- •§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пересылки материала для исследования в бактериологические лаборатории.
- •§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.
- •§ I. Определение ld50 по методу Рида и Менча. Ld50 - количество микроорганизмов (бактерий, вирусов), вызывающих гибель 50 % зараженных животных.
- •§ 3. Приготовить корпускулярные антигены из культур водного вибриона и кишечной палочки. Для этого:
- •§ 4. Методы иммунизации животных и получения иммунных сывороток:
- •§ 5. Реакция агглютинации:
- •§ I. Разбор методов приготовления 0- и н-антигенов.
- •§ 5. Определение титра агглютинирующей сыворотки. Для опыта необходимо иметь:
- •§ I. Учесть окончательный результат реакции агглютинации и определить титр испытуемой агглютинирующей сыворотки. Результаты опыта отметить в таблице, схема которой дана ниже.
- •§ 5. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:
- •§ 6.Реакция преципитации в агаре.
- •§2. Реакция лизиса.
- •§ 4. Реакция фагоцитоза. Постановка опсоно-фагоцитарной реакции.
- •§5. А)Прямой иммунофлуоресцентный метод.
- •§ I. А). Опыт трансдукции.
- •Часть II. Вирусология
- •§ I. Зарисовать феномен бактериофагии на плотной питательной среде.
- •§ 2. Для титрования бактериофага используются различные методы. Наиболее точным является метод агаровых слоев, предложенный Графа. Сущность этого метода состоит в следующем.
- •§ 3. А). Элементарные тельца (вирионы) вируса оспы (тельца Пашена) в препаратах, окрашенных по Морозову, выглядят в виде мелких точек круглой или удлиненной формы, темно-коричневого цвета.
- •§ 4. Методы заражения животных разнообразны: внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, заражение в мозг и другие.
- •§ 6. С помощью камеры Горяева подсчитают количество клеток в 1 мл. Клетки считают по всей камере под малым увеличением микроскопа . Количество клеток в 1 мл вычисляют по формуле:
- •3. Методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний
- •3Анятие 3
- •1. Вирусологические:
- •2. Эпидемиологические:
- •§ 3. Для диагностики вирусных гепатитов могут быть использованы методы:
- •Часть III
- •§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на наличие заболевания бруцеллезом у данного больного?
- •§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм сти).
- •§ 2,3. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными 0- и н-сыворотками, принимая во внимание биохимические свойства выделенной культуры. Результаты зарегистрировать в тетрадь.
- •§ 1. Произвести макро- и микроскопическое исследование подозрительных колоний (бесцветные, прозрачные). Посеять подозрительную колонию на скошенный мпа и среды "пестрого ряда".
- •§ 1. Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры кишечной палочки с поливалентными ок-сыворотками:
- •§1. Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.
- •§1. Промикроскопировать готовые препараты-мазки из культуры коклюшной палочки с окраской по Граму и зарисовать.
- •§2. Разбор методов микробиологической диагностики коклюша: бактериологического и серологического. Дифференциация коклюшной и паракоклюшной палочек.
- •§2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.
- •§3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.
- •§7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин ррd-l, вакцина бжп.
- •§1. Произвести учет результатов определения биохимической активности коринебактерий и пробы на токсигенность.
- •§1. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты-мазки риккетсий. По Романовскому-Гимза риккетсии окрашены в красный цвет.
- •§2. Разбор и демонстрация реакции агглютинации с риккетсиозным антигеном (взвесь убитых формалином риккетсий). Результаты реакции зарегистрировать.
§ 1. Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры кишечной палочки с поливалентными ок-сыворотками:
ОКА (018ac:K77; 020:К84; 025:KII; 026:К60; 033:К-; 044:К74; 055:К59; 075:К-; 086а:К6I и др. всего 22 серовара).
ОКБ (020:К84; 026:К60; 055:К59; 0IIIав:К58; всего 4 серовара).
ОКС (086a:K61; 0125:K70; 0126:К71; 0127:К63; 0128авc:К67; 0119:К69; 033:К-; всего 7 сероваров).
ОКД (0118ac:K77; 025:KII; 044:К74; 075:К-; 0114:K90;0142:K86; 0143:К-; 0111:К-; "408"; всего 9 сероваров).
ОКЕ (0124:K72; 0142:K86; 0143:K-; 0144:K-; 0151:К-; всего 5 сероваров).
При положительной реакции с одной из поливалентных ОК-сывороток культура далее проверяется в реакции агглютинации на стекле с иммуноглобулинами диагностических ОК-сывороток или с ОК-сыворотками, входящими в состав поливалентной.
Полученные положительные результаты подтверждаются с адсорбированными групповыми сыворотками в реакции агглютинации на стекле с культурой, прогретой в течение часа при 100° С.
При отсутствии иммуноглобулинов и адсорбированных сывороток определение ОК-групп эшерихий проводят при помощи ОК-сывороток в пробирочной реакции агглютинации с живой и гретой (при 100° С - 1 час) культурами. Принадлежность диареегенных кишечных палочек к ОК-группе определяют на основании реакции агглютинации живой культуры с соответствующим ОК-иммуноглобулином или ОК-сывороткой и гретой культуры с адсорбированной групповой О-сывороткой.
Б. Микробиологический диагноз холеры (окончание).
§ 1. Найти на щелочном МПА колонии, подозрительные на колонии холерного вибриона (прозрачные с серо-голубым оттенком) , приготовить из них препараты-мазки, окрасить по Граму и промикроскопироватъ.Промикроскопировать с окраской по Граму пленку, выросшую в посевах на пептонной воде. Поставить реакцию агглютинации на стекле выросшей культуры в колониях с холерной О-сывороткой. Результаты зарисовать и записать в тетради.
Рисунок 1. Культура из колонии, выросшей на щелочном МПА. Окраска по Граму.
Рисунок 2. Культура из пленки на пептонной воде. Окраска по Граму.
Рисунок 3. Реакция агглютинации кишечной палочки с ОК-сыворотками.
Заключение___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Рисунок 4. Реакция агглютинации выделенной культуры вибриона с холерной О-сывороткой.
1 – опыт
2 – контроль
Предварительное заключение_____________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________
ЗАНЯТИЕ 11.
Дата_______
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ.
План занятия.
1. Изучение особенностей роста культур анаэробов.
2. Морфология анаэробных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.
3. Микробиологический диагноз анаэробных инфекций. Разбор методов диагностики столбняка и газовой гангрены. Посев исследуемого материала по способу Вейон-Виньяля, Фортнера, на среду Тароцци.
.4. Ускоренное обнаружение С.реrfringens. Демонстрация роста на среде Вильсон-Блера, среде Тароцци и на молочной среде.
5. Биологическая проба на мышах для обнаружения ботулинического токсина. Демонстрация, разбор методики.
6. Демонстрация иммунопрепаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.
Методические указания.