§ I. Определение ld50 по методу Рида и Менча. Ld50 - ко­личество микроорганизмов (бактерий, вирусов), вызывающих гибель 50 % зараженных животных.

Для определения LD50, например, для исследуемого вируса, готовят 10-кратные разведения вируссодержащего материала от 10^-1 до 10^-8, так как летальность животных прямо пропорциональна логариф­му разведения.

После приготовления соответствующих разведений вируссодержащий материал вводят животным, например, белым мышам. Число живот­ных может быть большим, но обычно каждым разведением заражают 4-6 мышей.

Срок наблюдения за животными после их заражения должен быть равен сумме двух средних инкубационных периодов. Учитывается гибель животных, наступающая в сроки, которые соответствуют инкубационному периоду.

Например, при заражении животных различными разведениями вируссодержащего материала получены следующие результаты (табл.1).

Статистическая обработка по методу Рида и Менча результатов заражения животных производится с использованием кумулятивных, т.е. суммарных данных опыта (табл.2).

Для определения LD 50 учитываются дозы, расположенные ближе всего к той, которая дает 50 % летальности. Ближайшая доза, дающая более 50% летальности, является высшей критической дозой (в нашем примере ей соответствует разведение вируса 10^-4 ). Ближайшая доза, которая дает летальность менее 50 %, является низшей критической дозой (в нашем примере ей соответствует разведение 10^-5 ).

Отношение разницы между летальностью, обусловленной высшей критической дозой и 50, к разнице между летальностями, обусловлен­ными высшей и низшей критическими дозами, называется коэффициентом пропорциональности.

Определение LD50 для исследуемого вируса

(объяснение в тексте)

Таблица 1

	Разведения вируса
	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5	10^-6	10^-7	10^-8
Число погибших животных	4	4	4	3	1	0	0	0

Таблица 2

Разведения вируса	Абсолютные данные		Кумулятивные данные		% летальности
	Выжившие животные	Погибшие животные	Выжившие животные	Погибшие животные
10^-1	0	4	0	16	100
10^-2	0	4	0	12	100
10^-3	0	4	0	8	100
10^-4	1	3	1	4	80
10^-5	3	1	4	1	20
10^-6	4	0	8	0	0
10^-7	4	0	12	0	0
10^-8	4	0	16	0	0

Примечание: Если животное погибает раньше инкубационного периода, их исключают из опыта. Если последнее разведение вируса вызывает еще гибель животных, то его следует еще развести, так чтобы получить разведение, которое не вызывает гибель животных.

Рассчитываем коэффициент пропорциональности для нашего примера.

Коэффициент пропорциональности =

LD50 соответствует сумме логарифма высшей критической дозы и коэффициенту пропорциональности. Для нашего примера LD50 =10^-4,5

§ 2. Макро- и микроскопическое изучение культуры, выросшей из крови и органов белой мыши, вскрытой на предыдущем занятии. Обратить внимание на внешний вид и консистенцию выросшей культуры. Пригото­вить препарат-мазок и окрасить его по способу Ионэ для обнаружения капсулы. Зарисовать препарат.