Техника проведения реакции

Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (Ш).

Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 8 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают. Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А₂ (II).

В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд на смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда и хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).

Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Рисунок 5.1 - Трактовка результатов

При оценке результатов определения групп крови могут быть получены следующие варианты (рис. 5.2):

Стандартные сыворотки всех трех групп не вызывают агглютинации эритроцитов. Это указывает на то, что эритроциты не содержат агглютиногенов А и В , т.е. исследуемый образец крови относится к группе О(I).

Стандартные сыворотки группы O(I) и В (III) агглютинировали эритроциты, а с сывороткой А(II) агглютинации не наступило. Исследуемая кровь содержит агглютиноген А, т.е. принадлежит к группе А (П).

Стандартные, сыворотки 0 (I) и А (II) показали положительную реакцию, а сыворотка В(III) - отрицательную. Эритроциты испытуемого образца крови содержат агглютиноген В, т.е. относятся к группе В(III).

Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты. Исследуемая кровь содержит аглютиногены А и В. Ее относят к группе AB(IV). Однако для окончательного заключения необходимо провести контрольное исследование на специфичность реакции со стандартной сывороткой AB(IV). Лишь отсутствие агглютинации исследуемой крови с сывороткой группы AB(IV) позволяет отнести кровь к четвертой группе.