Инструментальные методы анализа

24.3. Колоночная жидкостная хроматография

Вколоночной жидкостной хроматографии сорбент находится в стеклянной или металлической трубке (колонке).

Вклассическом варианте колоночной хроматографии используются сорбенты с диаметром частиц более 100 мкм. Колонка может иметь длину до нескольких метров. Элюент продвигается по колонке под действием силы тяжести.

Ввысокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

используются сорбенты, обладающие особыми свойствами (однородность частиц, ненабухаемость и т.д.). Диаметр частиц этих сорбентов не превышает 50 мкм. Часто в ВЭЖХ применяют сорбенты с различными привитыми группами (см. рис. 24.1). Скорость движения подвижной фазы и эффективность разделения в ВЭЖХ значительно выше, чем в классическом варианте хроматографии.

24.3.1. Устройство жидкостного хроматографа

Основные узлы жидкостного хроматографа показаны на рис.

24.5.

ввод пробы

блок подачи

устройство

подвижной фазы

для ввода пробы

резервуары для

колонка

детектор

регистрирующее

подвижной фазы

устройство

Рис. 24.5. Принципиальная схема жидкостного хроматографа

Подвижная фаза подаётся в колонку с помощью насоса. Блок подачи элюента может включать в себя также систему дегазации, устройство для градиентного элюирования, измерители давления. До по-

падания в насос подвижная фаза должна быть профильтрована и освобождена от растворённых в ней газов (“дегазирована”), так как пузырьки газа при попадании в колонку приводят к снижению её эффективности, а при попадании в детектор вызывают беспорядочные колебания нулевой линии.

Ввод пробы в жидкостный хроматограф может проводиться с помощью петлевого дозатора, микрошприца (роль шприца может выполнять сам насос) и др.

Хроматографические колонки в ВЭЖХ, в отличие от газохроматографических колонок, прямые. Они имеют длину 10 - 30 см и внут-

307

Раздел 3

ренний диаметр 4 - 6 мм, а в микроколоночных хроматографах, соответственно, 5 - 7 см и 1-2 мм. Корпус колонки представляет собой цилиндрическую трубку, изготовленную из стекла, нержавеющей стали или полимерного материала. На верхнем и нижнем концах колонки расположены фильтры, представляющие собой диски из пористой нержавеющей стали. Назначение фильтров – удерживание сорбента в колонке и задержка механических примесей, которые могут находиться в подвижной фазе.

В табл. 24.3 перечислены детекторы, наиболее часто используемые в ВЭЖХ.

Табл. 24.3

Характеристика некоторых детекторов, используемых в жидкостных хроматографах

Детектор	Измеряемый сигнал		Определяемые
			вещества
дифференциальный	разность показателей прелом-		универсальный
рефрактометр	ления элюата и элюента
УФ-детектор с фик-	разность между поглощением		вещества,	поглощающие
сированной длиной	элюата и элюента при 254 нм		электромагнитное		излу-
волны (254 нм)			чение с	длиной	волны
			254 нм
спектрофотометри-	разность между поглощением		вещества,	поглощающие
ческий	элюата и элюента при вы-		излучение	с выбранной
	бранной длине волны		длиной волны
флуоресцентный	интенсивность	испускаемого	вещества,	обладающие
	света		флуоресценцией
кондуктометриче-	низкочастотная	электропро-	ионы
ский	водность элюата
потенциометриче-	разность потенциалов ионо-		ионы
ский	селективного	электрода и
	электрода сравнения
вольтамперометри-	сила тока при постоянном по-		вещества,	способные к
ческий	тенциале электродов		электрохимическому
			окислению	или	восста-
			новлению

24.3.2. Практическое применение

Высокоэффективная жидкостная хроматография используется для разделения, в том числе и препаративного выделения, обнаружения и идентификации, а также количественного определения веществ различной химической природы (как полярных, так и неполярных, как ионов, так и молекул, как низкомолекулярных, так и высокомолекулярных).

308