100. Методы культивирования. Внутриклеточные включения при вирусных инфекциях. Цитопатическое действие вирусов.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Их подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Количество вирусных частиц определяют методом титрования по цитопатическому действию (ЦПД) в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для определения их видовой принадлежности. Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотонич. р-ром NaCl. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты. Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток, либо амниотической жидкости куриного эмбриона. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах: используют эмбрионы в возрасте от 8 до 14 дней в зависимости от вида вируса, способа заражения и задач исследования. Вирусы гриппа культивируются в 9-10, осповакцины - в 12, паротита - в 7-дневных куриных эмбрионах. Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек. Его также используют для дифференциации, селекции вирусов, а также для определения их концентрации в исследуемом материале. Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Выбор экспериментальных животных определяется целью работы и видовой чувствительностью к изучаемому вирусу. Для заражения используют обезьян, кроликов, морских свинок, хомячков, белых крыс и мышей. Лабораторных животных заражают различными способами в зависимости от тропизма вируса к определенным тканям. Так, например, для культивирования нейротропных вирусов заражение производят преимущественно в мозг (вирусы бешенства, клещевого энцефалита и др.), культивирование респираторных вирусов осуществляется при интраназальном инфицировании животных (вирусы гриппа), дерматотропных (вирус оспы) - путем накожного и внутрикожного заражения. Формирование включений: включения наиболее часто формируются при вирусных и хламидиозной инфекциях. Они могут состоять или из собранных вирусных частиц, или из остатков вирусных нуклеиновых кислот. Включения могут образовываться в ядре и цитоплазме клеток. Их присутствие может помогать в установлении правильного диагноза при гистологическом исследовании. Цитомегаловирус- увеличение клеток (цитомегалия).Эозинофильные большие внутриядерные включения, окруженные светлым ободком. Вирусы герпеса- большие эозинофильные внутриядерные включения, окруженные светлом ободком. Ядра в виде матового стекла. Гигантские клетки с 3-8 ядрами. Вирус натуральной оспы -большие, зернистые, округлые эозинофильные цитоплазматические включения (тельца Гарньери). Вирус бешенства-округлые, 2-10 мкм в диаметре, эозинофильные цитоплазматические включения (тельца Негри). Вирус гепатита В-цитоплазма в виде матового стекла. Вирус кори- многоядерные (10-1000 ядер) гигантские клетки Вартина-Финкельдея. Маленькие эозинофильные внутриядерные включения. Вирус контагиозного моллюска-гомогенные эозинофильные цитоплазматические включения, заполняющие клетку и оттесняющие ядро.

Репродукция большинства вирусов сопровождается подавлением синтеза клеточных ДНК, РНК и белков, чтобы предотвратить или ограничить выработку интерферона и обеспечить собственную репродукцию прежде, чем в организме разовьется полноценный иммунный ответ. Чаще всего вирусы специфически угнетают синтез клеточных белков, нарушая образование инициаторного комплекса трансляции, поскольку для трансляции вирусных мРНК этот комплекс обычно не нужен. Например, протеаза вируса полиомиелита расщепляет компонент инициаторного комплекса трансляции. У вируса простого герпеса один из белков матрикса вызывает быстрое разрушение клеточных мРНК.