Бактериологическое исследование синовиальной жидкости

1 День исследования:

- если жидкость взята в объеме более 5 мл то ее центрифугируют в стерильных пробирках в течение 10-30 минут при 2500-3000 об/мин;

- далее с помощью стерильных пастеровских пипеток с соблюдением правил асептики отбирают отдельно супернатант и осадок; супернатант хранят в холодильнике в течение 1 недели, на случай, если будет необходимо провести дальнейшие исследования;

- из осадка готовят мазок, окрашивают по Граму; оставшуюся часть материал засевают на плотные среды и в бульон;

- при обнаружении в материале крупных сгустков крови осадок после центрифугирования переносят в стерильный размельчитель тканей, добавляют 0,5 мл стерильного бульона и аккуратно гомогенизируют смесь, размельчая сгустки и высвобождая адсорбированные ими бактерии. Однако, при подозрении на грибковую этиологию инфекции нельзя проводить интенсивное размельчение, так как это может разрушить клетку гриба;

- посев проводят на кровяной и шоколадный агар, инкубируют 18-24 часа при 35⁰С в атмосфере 5-7% СО₂ и влажности 60-80%; неселективный анаэробный агар, инкубируют в анаэробных условиях при 35⁰С в течение 48 часов; в жидкую тиогликолевую среду с добавлением 10% кроличьей сыворотки или сыворотки крупного рогатого скота, гемина, витамина К1 при условиях инкубации 35⁰С в аэробных условиях.

При необходимости можно проводить посевы на дополнительные питательные среды для выделения микобактерий, гонококков и других микробов.

Учет результатов посевов:

Через 24 часа:

- изучают рост на плотных и жидких средах при культивировании в аэробных условиях;

- из бульона готовят мазки и окрашивают по Граму;

- если микроорганизмы присутствуют только в тиогликолевой среде, то проводят субкультивирование (высев) в аэробных и анаэробных условиях. Выбор сред зависит от результатов бактериоскопии приготовленного мазка;

- если в мазке выявлены различные по морфологии бактерии, то для дальнейшего культивирования используют дополнительный набор элективных сред;

- из всех типов выросших колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и проводят дальнейшую идентификацию возбудителя.

Из изолированных колоний готовят суспензию для определения чувствительности к антибиотикам;

Через 48 часов:

- изучают посевы на плотных и жидких средах и высевы (субкультуры) от предыдущего дня для оценки изменений характера роста;

-сравнивают рост на чашках с первичным посевом с характером роста субкультур, отмечая сходство и различия;

- изучают чашки с первичным посевом в анаэробных условиях, отмечают каждый тип колоний и проводят высев (получение субкультур) на кровяной и анаэробный агар; посевы инкубируют в аэробных и анаэробных условиях;

- проводят сравнительную оценку всех типов колоний и исследуют мазки;

- первичные чашки сбрасывают, но сохраняют хотя бы одну, которая содержит колонии каждого типа (при культивировании медленно растущих микробов за посевами наблюдают до 7 дней);

Через 72 часа:

- если рост отсутствует, то посевы еще оставляют инкубироваться в течение 24часов;

- если рост в бульоне обнаружен, то делают мазок и по его результатам проводят высев на среды для аэробов и/или анаэробов;

На 4 сутки:

- исследуют бульоны с отсутствием роста в предшествующие дни и сбрасывают те, в которых рост не выявлен; если обнаружен рост, то культуру изучают дальше;

- культура идентифицируется по все остальным биологическим свойствам (биохимическим, дополнительным, антигенным).