1. Забор, хранение и транспортировка крови для бактериологического исследования:

Забор крови проводят из локтевой вены.

Обработка места венепункции:

- поверхность протирают тампоном, смоченным в 5% йодном растворе, круговыми движениями от центра к периферии;

- обработанный участок высушивают и затем кожу тщательно очищают 70% этанолом.

Обработанный участок вновь высушивают и затем:

1. Прокалывают вену стерильной иглой со шприцем на участке забора и забирают 10 мл крови на гемокультуру. Над пламенем спиртовки открывают флакон со средой и вносят из шприца кровь осторожно (чтобы не замочить пробку), перемешивают содержимое флакона.

2. Для серологической диагностики кровь берут в объеме 2-5 мл в стерильную пробирку.

Примечание:

- забранную кровь вносят в емкости с аэробными или анаэробными условиями;

- если у больного отмечается лихорадка неясного генеза, то кровь берут поэтапно:

- первый этап – берут 2 пробы из разных кровеносных сосудов;

-второй этап – через 24 или 36 часов берут еще две пробы на пике температуры;

- взятие крови из постоянного внутривенного или внутриартериального катетера допускается только в случаях подозрения на катетер-ассоциированную инфекцию. Если больной уже лечится антибиотиками, то у него в течение 48 часов забирают 6 проб.

Хранение – не более 2 часов при комнатной температуре.

Транспортировка. Используются стерильные транспортировочные емкости со средой, содержащей нейтрализаторы антибиотиков.

Забор, хранение и транспортировка крови для вирусологического исследования:

Забор крови:

- забор крови проводят так же как для бактериологического исследования;

-при исследовании плазмы на вирусы используют пробирки с антикоагулянтом – этилендиаминтетраацетатом (ЭДТА) или гепарином. Отделенную плазму (после центрифугирования) берут в асептических условиях и исследуют.

Хранение – не более 2 часов при комнатной температуре.

При постановке ПЦР для выявления НК вирусов плазму следует охладить или заморозить при – 70⁰С для более длительного хранения.

Транспортировка. Используют стерильные транспортировочные емкости со средой, содержащей реагенты, разрушающие форменные элементы крови. Материал транспортируют в одноразовых сухих пробирках с вмонтированным зонд-тампоном (тубсер).

Забор, хранение и транспортировка крови для микологического исследования:

- забор проводят так же как для бактериологического исследования;

-хранить до начала исследования не более 2 часов при комнатной температуре;

- транспортировать так же как и при бактериологическом исследовании.

Забор, хранение и транспортировка крови для паразитологического исследования:

- забор, хранение и транспортировку проводят так же как и при бактериологическом исследовании;

- для диагностики паразитарных инвазий используют нативную кровь или кровь с добавлением антикоагулянтов.

Бактериологическое исследование крови

Посев крови проводят в 50-100 мл. сахарного бульона, а также параллельно в тиогликолевую среду, при подозрении на брюшной тиф - в желчный бульон или среду Раппопорт. Обязательно выдерживают соотношение крови и среды 1:10 .

Посевы помещают в термостат и инкубируют в течение 10 дней. Просмотр посевов проводят ежедневно. О наличии микробов свидетельствует: помутнение среды; осадок эритроцитов и хлопьевидный осадок на их поверхности ,пленка на поверхности; гемолиз эритроцитов;

При наличии роста делают высевы на чашки с 5% кровяным агаром. Изучают колонии, делают посев на скошенный агар для накопления и идентификации культуры, определяют чувствительность к антибиотикам.

Интерпретация результатов

- анализ можно считать отрицательным, если по прошествии 10 дней после посева крови, роста микроорганизмов на питательных средах не обнаружено;

- выделение патогенных видов свидетельствует об их этиологической роли в заболевании;

- при выделении условно-патогенных микроорганизмов следует учитывать идентичность гемокультуры с культурами, выделенными из другого материала от этого больного.

Для определения истинной этиологической ролимикроорганизмов необходимо учитывать следующие факторы:

- обнаружение одного и того же микроорганизма в посевах двух и более проб крови;

- быстрый рост микроорганизмов (24ч.- 48 ч);

- проявление одинаковых биологических свойств и чувствительности к антибиотикам у разных изолятов, полученных из пробы крови;

Катетер - ассоциированные инфекции крови (КАИК)

В настоящее время отмечается рост числа катетер – ассоциированных инфекций, которые занимают третье место среди всех нозокомиальных инфекций и первое место среди причин бактериемии.

КАИК - первичная бактериемия у пациентов с сосудистым катетером и системными клиническими проявлениями инфекции, отсутствием других явных источников инфекции и выделением с поверхности катетера количественным (10³ КОЕ/ мл с сегмента катетера) или полуколичественным методом ( 15 КОЕ/ мл с кончика катетера или подкожного сегмента) того же микроорганизма, что из крови. Или при получении пятикратной разницы количества микробных клеток в гемокультурах, взятых одновременно из центрального венозного кровотока (ЦВК) и периферической крови. Чаще всего при КАИК выделяются коагулазо–негативные стафилококки и S. aureus. Значительно реже выделяются Enterococcus spp ,Candida spp , Pseudomonas spp. еще реже представители семейства энтеробактерий.

У пациентов с непродолжительно стоящим катетером его колонизация чаще всего происходит S. aureus, Bacillus spp, Corynebacterium spp. Поверхность катетера может колонизироваться также с кожи рук медперсонала P. aeruginosa, Acinetobacter spp, Stenotrophomonas. maltophilia, C. albicans.

Колонизация катетеров возможна также при использовании контаминированных инфузионных растворов. В этом случае наиболее часто выделяются Enterobacter spp , Citrobacter spp , Serratia spp.

Разработана классификация и критерии диагностики КАИК (Seifert H , Jancen B. 2004г.)

1. Колонизированный катетер: в этом случае не наблюдается клинической симптоматики .Отмечается рост бактерий > 15 КОЕ/ мл –или -рост 10³ КОЕ/ м – при использовании количественного метода оценки колонизации катетера.

2.Инфекция места введения катетера: гиперемия, болезненность. Нагноение кожи в пределах 2см. от места введения катетера. Культуральный метод исследования крови дает отрицательный результат. При этих формах катетер колонизирован, а бактериемии нет или есть.

3. «Карманная» инфекция: нагноение подкожного кармана в месте имплатированного катетера. Культуральный метод исследования крови дает отрицательный результат.

4. Туннельная инфекция: гиперемия, уплотнение и нагноение в пределах более 2см. от места введения катетера и по направлению вдоль туннелированного катетера. Культуральное исследование крови дает отрицательный результат.

5. Инфекция, связанная с инфузатом: выделение одного и того же микроорганизма из переливаемого раствора и крови из периферической вены при наличии системных признаков инфекции.