Характеристика колоний энтеробактерий на некоторых дифференциально-диагностических средах

Питательная среда	Дифферен-цирующий компонент	Индикатор	Цвет колоний в зависимости от ферментации углеводов
			положительно	отрицательно
Левина	лактоза	эозин, метиленовый синий	темно-синий с металлическим блеском	бесцветный
Эндо	лактоза	основной фуксин	красный с металлическим блеском	бесцветный
Плоскирева	лактоза	нейтральный красный	красный	бесцветный

Протеолитические свойства у бактерий изучают при посеве в столбик желатина. При наличии протеолитических ферментов проис­ходит разжижение желатина, процесс этот идет сверху. Обращают вни­мание также и на характер разжижения, так как разные виды микро­бов дают характерную для них форму разжижения: послойное, т.е. идет ровно сверху вниз, характерно для синегнойной палочки; в форме чулка дает стафилококк, в форме гвоздя – холерный вибрион. Протеолитическое действие микроорганизмов можно наблюдать при посевах на свернутую сыворотку, вокруг колоний появляется углубление.

Показателем глубокого расщепления белков служат аммиак, сероводород. Для выявления этих газов посев делают на пептонную воду или МПБ, вещества обнаруживают с помощью индикаторных бумажек, которые помещают над питательной средой так, чтобы они не прикасались к среде, прижимая бумажки к стеклу ватной пробкой.

Аммиак определяют по посинению розовой лакмусовой бумажки. Сероводород определяют с помощью фильтровальной бумажки, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. Образовавшийся сероводород взаимодействует с уксуснокислым свинцом, образуя сульфид свинца, вещество черного цвета, бумага в результате чернеет. Кроме того, для определения сероводорода можно делать посев культуры бактерий уколом в столбик питательной среды, содержащей соли для определения сероводорода. При наличии сероводорода среда чернеет.

Индол определяют несколькими способами:

а) способ Эрлиха. В пробирку с культурой добавляют 2–3 мл эфира, после энергичного встряхивания добавляют несколько капель реактива Эрлиха. В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание.

б) способ Мореля. Индол выявляют с помощью индикаторной бумажки, смоченной насыщенным раствором щавелевой кислоты, в случае образования индола нижняя часть бумажки через несколько дней ро­зовеет.

В состав "пестрого" ряда может входить молоко, при посеве на которое можно обнаружить как кислотообразование: при разложении молочного сахара лактозы образуется молочная кислота, которая вызывает денатурацию казеина и молоко створаживается, так и протеолитическое действие – сгусток казеина растворяется с образованием пептона, что придает молоку желтоватый цвет и молоко просветляется – пептонизация молока.

Изучение сахаролитических и протеолитических ферментов часто оказывается достаточным для определения вида, но в некоторых случаях возникает необходимость включать в изучение другие ферменты: каталазу, цитохромоксидазу, фосфатазу и др., редуцирующую способность.

Ферментативную активность бактерий можно изучить не только на средах Гисса, но и с помощью системы индикаторной бумажной (СИБ), которая состоит из бумажных дисков, пропитанных реактивами и высушенных. Эти диски опускают в пробирку с исследуемой культурой и уже через 3-4 часа инкубации в термостате судят о разложении реактивов по изменению цвета диска.

ЗАНЯТИЕ 9

ТЕМА. Методы выделения чистых культур. Дыхание бактерий. Методы культивирования и выделения анаэробных бактерий. Рост и размножение микроорганизмов