Признаки, дифференцирующие биовары V. Cholerae о1

Признаки	Биовары
	V. cholerae eltor	V. cholerae cholerae
Лизабельность холерными фагами:
Классическим	-	+
Эльтор	+/-	- (+)
Чувствительность к 50 ед/мл полимиксина В	- (+)	+
Агглютинация куриных эритроцитов	+ (-)	-
Образование ацетилметилкарбинола	+ (-)	-

Культуры, имеющие признаки вибрионов по морфологии колоний и клеток, тесту на индофенолоксидазу и ферментативной активности на полиуглеводной среде, не агглютинирующиеся на стекле холерными сыворотками О1 и О139 серогрупп, выделенные от больных острыми кишечными инфекциями, идентифицируют по тестам, определяющим принадлежность к роду Vibrio. Принадлежащие к V.cholerae культуры изучают в пробе с диагностическими фагами.

У выделенных от больных штаммов холерных вибрионов не О1/О139 серогрупп определяют антибиотикограмму.

Ответ о положительном результате может быть предварительным и окончательным.

Предварительный положительный ответ выдают по результатам ускоренного исследования нативного материала и после подращивания его в пептонной воде с помощью иммунофлюоресцентного метода, специфической иммобилизации, РНГА, а также по слайд-агглютинации сыворотками О1 и О139 подозрительных на холерный вибрион колоний. При наличии возможности на этом этапе может быть использована ПЦР со специфическими праймерами. Предварительный ответ, в случаях проведения срочных анализов, сообщают устно и только при совпадении результатов не менее двух методов.

В условиях эпидемии холеры при проведении массовых исследований после идентификации первых культур такой ответ дает право на проведение противоэпидемических мероприятий.

Окончательный положительный ответ выдают по результатам сокращенной или полной идентификации выделенной культуры в течение 36–48 ч.

6. Методы изучения свойств холерных вибрионов Серологические методы

Принадлежность холерных вибрионов к О1 или О139 серогруппе определяют в слайд-агглютинации или развернутой реакции агглютинации с холерными агглютинирующими сыворотками О1, Инаба, Огава, и с холерной сывороткой О139 серогруппы в соответствии с инструкциями по применению препаратов, а также в других реакциях с иммуноглобулиновыми препаратами, предназначенными для ускоренной диагностики холеры и идентификации возбудителя.

Слайд-агглютинацию ставят на обезжиренном стекле, помещенном в чашку Петри или на дне самой чашки, используя подозрительную на холерный вибрион колонию и (или) агаровую 12–18-часовую культуру и сыворотки О1 серогруппы в разведении 1:50–1:100. Сыворотку О139 разводят в соответствии с указанием на этикетке. Реакцию обязательно сопровождают контролями культуры в 0,9 %-м растворе хлорида натрия.

Развернутую реакцию агглютинации ставят и учитывают по общепринятой методике в соответствии с инструкцией по применению диагностических сывороток.

МФА – метод флюоресцирующих антител. Метод дает возможность ускоренно идентифицировать выделенную культуру, а также выявить возбудителя холеры О1 и О139 серогруппы при содержании его в исследуемом материале не менее чем 10 м.к./мл. Исследованию подлежат выделенная культура, нативный материал (испражнения и рвотные массы) и материал после подращивания.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с использованием диагностикума эритроцитарного холерного иммуноглобулинового

Порядок подготовки материала, ингредиентов, постановки реакции и ее учет изложены в «Инструкции по применению диагностикума эритроцитарного холерного антительного иммуноглобулинового», прилагаемой к препарату.

Использование микротест-систем и СИБ

Для определения оксидазы, образования индола и сероводорода, декарбоксилаз лизина, орнитина, дигидролазы аргинина, ферментации углеводов и многоатомных спиртов при идентификации вибрионов можно также использовать Систему индикаторную бумажную (СИБ) и микротест-ситемы для биохимической идентификации вибрионов.

Микротест-система для биохимической идентификации

вибрионов (MTC-V)

Микротест-система предназначена для определения ферментативной активности микроорганизмов рода Vibrio и идентификации видов. (MTC-V) представляет собой контейнер с ячейками, на дне которых находятся субстратно-индикаторные питательные среды, высушенные при температуре 44–46 С^о, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Идентификацию культур, выделяемых непосредственно из нативного материала, производят со скошенного питательного агара рН 7,6 через 18–22 ч инкубации при температуре 37,0 С^о. Микробную взвесь, соответствующую 10 ед. стандарта мутности, готовят в стерильной дистиллированной воде или пептонной воде, по 0,2 мл вносят во все ячейки контейнера.

Учет результатов проводят через 18–22 ч инкубации при температуре 37 С^о в соответствии с цветовым указателем, приложенным к MTC-V.

Микротест-система для ускоренного определения групп

вибрионов по Хейбергу (МТС-Х)

Микротест-система предназначена для ускоренного определения по ферментативной активности групп вибрионов по Хейбергу. (МТС-Х) представляет собой контейнер с ячейками, на дне которых находятся субстратно-индикаторные питательные среды, высушенные при температуре 44–46 С^о, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Идентификацию культур, выделяемых непосредственно из нативного материала, производят со скошенного питательного агара рН 7,6 через 18–22 ч инкубации при температуре 37,0 С^о. Микробную взвесь, соответствующую 10 ед. стандарта мутности, готовят в стерильной дистиллированной воде или пептонной воде, по 0,2 мл вносят во все ячейки контейнера. Учет результатов проводят через 4–5 ч инкубации при температуре 37 С^о в соответствии с цветовым указателем, приложенным к МТС-Х.