Генетические рекомбинации у бактерий

Виды Фактор, осуществляющий Примеры

генетических передачу передаваемых

рекомбинаций признаков

у бактерий

Трансформация ДНК донора Любые признаки

Трансдукция Умеренный фаг Любые признаки

генерализованная)

gal или bio

(специализированная)

Жгутики сальмонелл

(абортивная)

токсигенность дифтерийных палочек

(лизогенная конверсия)

Таблица

Классификация фагов по морфологии

I	II	III	IV	V	VI
Нитевидные	Без отростка	С аналогом отростка	С коротким отростком	С длинным отростком	С длинным отростком и сокращающимся чехлом
ДНК- содержащие	РНК- содержащие	ДНК – или РНК-содержащие	ДНК- содержащие	ДНК- содержащие	ДНК- содержащие

пластина

Рис.3. Строение фага

Для определения количества бактериофагов используют разные методы.

1. Титрование фага на жидких средах по методу Аппельмана.

Титрование фага проводят для того, чтобы определить его активность, которая выражается титром. Титр фага – то наибольшее разведение, в котором произошел лизис тест-микроорганизмов в условиях опыта (обозначается 10^-4 и т.п.).

В десять пробирок помещают по 4,5 МПБ. Методом переката готовят последовательные разведения фага, для чего в первую вносят 0,5 мл гомологичного фага (разведение 10^-1), сменив пипетку содержимое пробирки перемешивают, затем берут 0,5 мл и переносят во вторую (разведение 10^-2) и т.д. до десятой пробирки (разведение 10^-10), меняя каждый раз пипетку. Далее в них вносят по 1 капле четырехчасовой взвеси тест-культуры, помещают в термостат и через 18-20 часов проводят учет результатов.

Учет результатов начинают с контроля, в этой пробирке должен наблюдаться рост культуры, содержимое пробирки станет мутным. Фаг должен подействовать на культуру и лизировать ее, содержимое пробирки станет прозрачным. В пробирках, где оказался хотя бы один фаг, роста культуры не будет.

Таблица 28

Схема титрования фага по Аппельману

№№ пробирки	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
Разведение фага	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5	10^-6	10^-7	10^-8	10^-9	10^-10
Ингредиенты
МПБ, мл	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5	4,5
Испытуемый фаг, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Взвесь микробов	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к
Результаты	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+

Примечание: «-» – отсутствие роста культуры; «+» – рост культуры.

Титр фага – 10^-7.

2. Титрование фага по методу Грациа.

Этим методом можно одновременно с титром фага определить количество фаговых частиц в исследуемом материале. Метод основан на том, что каждая частица фага, фиксированная агаром, дает зону просветления (лизиса) на чашке с газоном чувствительного к нему микроба.

Титруемый фаг разводят от 10^-1 до 10^-9 (как в предыдущем опыте). В пробирки с расплавленным 0,7% мясо-пептоным агаром вносят 1 мл фага из каждого разведения и 0,1 мл смыва 4-х часовой культуры, чувствительной к фагу. Культуру и фаг тщательно перемешивают в агаре, после чего содержимое выливают на чашки Петри с 1,5% мясо-пептонным агаром. После застывания агара чашки переворачивают, подписывают и помещают в термостат на 24 часа. При учете подсчитывают количество стерильных пятен (негативных колоний фага). Учитываются только те чашки, на которых колонии фага четко отделены друг от друга. Результаты записывают следующим образом:

Таблица 29