1. Вопросы по теме занятия 2 для самостоятельного изучения их студентами:

1. Какие красители – кислые или основные – чаще применяются при окрашивании бактерий?

2. Какие способы окрашивания микробов известны?

3. Из каких последовательных этапов складывается приготовление препарата-мазка?

4. Для чего необходима фиксация препарата-мазка?

5. Какие существуют способы фиксации препаратов?

6. Как производится фиксация на пламени и как контролируется

её качество?

7. В чем заключается принцип окраски по Граму?

8. Как контролируется правильность окраски по Граму?

9. Почему зерна волютина, окрашенные метиленовым синим, получили название метахроматических?

10. Что собой представляет цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка, капсула?

11. Какую роль играет капсула?

12. Что такое споры бактерий, каковы их свойства?

13. Каковы методы окраски и выявления капсул?

14. Какова структура пептидогликана?

15. Каковы функции клеточной стенки бактерий?

16. Что такое рибосомы микроорганизмов?

17. Чем отличается ядерный аппарат бактерий от ядерного аппарата эукариотов?

20. Что такое протопласты?

21. Что такое L- формы бактерий

22. Что такое сферопласты?

23. Что такое инволюционные формы бактерий?

2. Дома студенту необходимо письменно ответить на следующие вопросы (домашняя работа сдается преподавателю на занятии):

1. Основные отличия сложных методов окраски от простых методов

2. Основные этапы механизма окраски грамположительных бактерий

3. Основные этапы механизма окраски грамотрицательных бактерий

4. Обязательные структуры элементы бактерий

5. Необязательные структурные элементы бактерий (капсула)

6. Морфологические особенности нуклеоида

7. Методы окраски компонентов бактериальной клетки (заполнить таблицу 3):

Таблица 3

Компонент бактериальной клетки	Метод обнаружения, окраска
Клеточная стенка
Капсула

Справочные и теоретические материалы

Окраска бактериального ядра: на предметном столе готовят мазок, высушивают на воздухе и фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты в течение 2-3 минут. Далее мазок подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при 60°С 2–3 мин и немедленно промывают водой. Затем мазок заливают 1% раствором формалина на 1,5 мин и вновь промывают водой. Окрашивают 0,1–1% раствором основного фуксина 1–2 мин, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На розовом фоне цитоплазмы выделяется нуклеоид, окрашенный в ярко-малиновый цвет.

Окраска стенки бактериальной клетки (метод Гутштейна): 1) препарат фиксируют над огнем и протравливают в течение 20-30 мин 5% раствором танина; 2) промывают в течение 60 сек и окрашивают карбол-фуксином 1–2 мин. Микробы окрашиваются в слабо красный цвет, а клеточная стенка – в интенсивно красный цвет.

Таблица 4

Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

№	Признак	Грамположительные микробы	Грамотрицательные микробы
1	Представители прокариот	1-шаровидные микробы; за исключением менингококков и гонококков; 2-дифтерийные палочки; 3-туберкулезные палочки; 4-спорообразующие палочки; 5-актиномицеты.	1-гонококки, менингококки; 2-палочковидные микробы (не образующие споры); 3-риккетсии; 4-хламидии; 5-спирохеты; 6-микоплазмы.
2	Строение клеточной стенки (КС)	Однослойная клеточная стенка, состоящая из 6-8 рядов пептидогликана+полисахарид+ тейхоевые кислоты	Двухслойная клеточная стенка: внутренний слой – пептидогликан, наружный слой представлен комплексом липополисахаридов (ЛПС), фосфолипидов, белков и липопротеидов
3	Строение цитоплазматической мембраны (ЦПМ)	Не связана с КС, имеет многочисленные выросты в цитоплазму	Тесно связана с КС, имеет незначительное число выростов в цитоплазму
4	Особенности строения жгутикового аппарата	Одна пара колец для закрепления жгутиков на уровне ЦПМ	Две пары колец: одна расположена на уровне ЦПМ; вторая – на уровне КС
5	Споро- образование	Да	Нет
6	Токсино- образование	Образуют экзотоксины	Образуют экзо- и содержат эндотоксины (ЛПС)
7	Основные антигены	Тейхоевые кислоты	Соматический О-антиген (ЛПС)
8	Действие лизоцима	(+) Образуют протопласты	(-), иногда (+), образуют сферопласты
9	Действие пенициллина	(+)	(-), иногда (+)

Способ Бури (выявление капсул): на конец предметного стекла наносят каплю туши и петлю исследуемого материала. Смесь перемешивают петлей и готовят мазок вторым предметным стеклом как мазок из крови. Высушивают на воздухе и, не фиксируя, микроскопируют с иммерсионной системой. Фон препарата окрашен в темно-дымчатый цвет, микробные тела и капсулы не окрашиваются и остаются бесцветными (негативный способ).

Способ Боголепова (для выявления капсул): негативный метод, при котором используется 2% колларгол, техника приготовления препарата, аналогичная способу Бурри. Фон препарата окрашен в коричневый цвет, тела микробных клеток окрашены в коричневый цвет, а капсула – в виде светлого ободка вокруг микробной клетки.

Способ Гинса (для выявления капсул): 1) по способу Бурри готовят препарат; 2) фиксируют этиловым спиртом 15–20 мин, промы­вают препарат; 3) окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3 в течение 3–5 мин; 4) промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. На темном фоне препарата контрастно выделяется неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Классификацию, морфологию микроорганизмов

2. Правила противоэпидемического режима и техники безопасности

3. Особенности ультраструктуры микробов, функции отдельных структур

Уметь:

1. Окрашивать препараты

2. Микроскопировать окрашенные микропрепараты

3. Дифференцировать микроорганизмы при микроскопии

ЗАНЯТИЕ 3

ТЕМА. Ультраструктура бактериальной клетки. Споры. Включения, жгутики. Методы исследования структурных подразделений клетки. Сложные методы окраски: Ожешко (Ганзена), Нейссера, Циля-Нильсена