1. Вопросы по теме «Возбудитель сибирской язвы» для самостоятельного изучения их студентами:

1. Каковы особенности морфологии сибиреязвенных бацилл?

2. Какие культуральные и ферментативные свойства возбудителя сибирской язвы Вы знаете?

3. В чем заключается патогенность сибирской язвы для человека, и какие факторы патогенности возбудителя сибирской язвы?

4. Какова экология и эпидемиология возбудителя сибирской язвы?

5. Каков патогенез сибирской язвы у человека, и какой формируется иммунитет?

6. Какова микробиологическая диагностика сибирской язвы у человека?

7. В чем особенность специфической профилактики (плановой и экстренной) сибирской язвы. Какова характеристика используемых препаратов?

8. Какова история создания вакцин, применяемых для профилактики сибирской язвы?

2. Дома студенту необходимо письменно ответить на следующие вопросы (домашняя работа сдается преподавателю на занятии):

1. Род и вид возбудителя сибирской язвы по лытыни

2. Фактор, обеспечивающий высокую устойчивость возбудителя сибирской язвы во внешней среде

3. Фактор, обеспечивающий защиту возбудителя сибирской язвы от иммунных механизмов хозяина

4. Реакция для обнаружения антигена сибирской язвы в исследуемом материале (ткани погибших животных – шкура, шерсть, кожа; трупный материал от человека)

5. Характеристика антигена, выявляемого в реакции Асколи

(отношение к температуре, химический состав)

6. Препарат для проведения аллергической реакции

7. Лечебно-профилактические препараты при сибирской язве (заполнить таблицу 41):

Таблица 41

Название препарата

Состав

Способ получения

Показания к применению

Характер действия в организме

Справочные и теоретические материалы

Bacillus anthracis вызывает инфекционное заболевание – сибирская язва. Сибирская язва – тяжелое острое инфекционное заболевание человека и животных.

Морфология. Bacillus anthracis: это крупный (1–2 х 6–10 мкм) палочковидный неподвижный микроорганизм, с обрубленными под прямым углом концами. В организме встречаются как единичные инкапсулированные палочки, так и их цепочки из 2–3 микробов, окруженные общей капсулой. В последнем случае концы сливаются, и цепочка напоминает собой бамбуковую трость.

Культуральные свойства. Сибиреязвенные бациллы хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительные. Капсулы бывают отчетливо видны при окраске по Романовскому-Гимзе. Для выявления спор используют метод Циля-Нильсена. Возбудитель сибирской язвы неприхотлив и может развиваться на различных лабораторных средах – на мясо-пептонном агаре и бульоне, желатине, молоке, экстрактах из семян растений, различных углеводных средах и даже настое сена. Палочка сибирской язвы является факультативным аэробом, поэтому на бактериологических питательных средах, при температуре 37–38 °С, хорошо растет при свободном доступе кислорода. На поверхности мясо-пептонного агара возбудитель сибирской язвы вырастает в виде типичных матового цвета, шероховатых бескапсульных колоний, состоящих из сплетений нитей с отростками («львиная грива», «голова медузы»). Гладкие, слизистые полупрозрачные колонии вырастают на поверхности при 80°С на лошадиной сыворотке, отдельные палочки и цепочки колоний снаружи покрыты капсулой. В мясо-пептонном бульоне бактерии сибирской язвы дают рост в виде комка ваты на дне пробирки, без помутнения среды. Капсулы при этом не образуются. Капсульная форма этого микроба является вирулентной. Оптимум роста находится в пределах 36 °С. При истощении и высыхании среды вегетативные формы микроба переходят в споровые. При этом в каждой палочке образуется одна центральная спора. Обязательным условием спорообразования является доступ кислорода и температура в пределах 12–20 °С. В организме человека и в невскрытом трупе споры не образуются. Вегетативные формы без кислорода растут очень медленно.

Биохимические свойства. При посеве уколом в столбик агара или желатина растет «елочной верхушкой вниз»; верхняя часть желатина разжижается («пуговка») протеолитическим ферментом. На кровяном агаре – рост без гемолиза. Молоко свертывается на 2–4-е сутки с последующей пептонизацией. Большинство штаммов разлагают галактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу (медленно), левулезу с образованием кислоты без газа. Сероводород образуется не всегда. При повышении щелочности в бульонной культуре может иметь место помутнение. Отдельные штаммы одновременно с образованием типичного осадка на дне сосуда с жидкой средой могут вызывать умеренное помутнение жидких сред.

Патогенные свойства. Вирулентность возбудителя сибирской язвы связана с капсулой в организме инфицированных животных. Капсула не только предотвращает фагоцитоз возбудителя, защищает его от воздействия бактерицидных веществ инфицированного организма, но и способствует фиксации капсульных бацилл на клетках, которые затем подвергаются дегенерации и гибели. Бескапсульные сибиреязвенные бациллы этими свойствами не обладают. Вирулентность бацилл антрацис обусловлена, также, образованием ими токсина как капсульными, так и бескапсульными штаммами.

Антигенные свойства. В теле возбудителя сибирской язвы содержится термостабильный «соматический» антиген полисахаридной природы, сохраняющийся длительное время в трупном материале; в капсуле обнаружен протеиновый антиген – полипептид D-глютаминовой кислоты. Исключительный интерес представляет наследственно измененные штаммы возбудителя сибирской язвы – мутанты, утратившие способность образовывать специфическую капсулу, превратившиеся из высоковирулентных штаммов в вакцинные штаммы, что используется для практических целей. Из наследственно измененных авирулентных штаммов изготавливают иммунопрофилактические вакцины, применяемые в медицинской и ветеринарной практике. В зависимости от первичного проникновения и последующей локализации этого микроорганизма развиваются: • кожные;

• висцеральные (легочная и кишечная);

• висцерально-генерализованные клинические формы болезни.

Эколого-эпидемиологические особенности. Сибирская язва может возникать на всех континентах и во всех странах в связи с производством, потреблением и обработкой животного сырья (мясо, шерсть, шкуры и т. п.) и уходом за больными животными.

Эпидемическая ситуация в РФ и в мире ухудшилась: в странах Юго-Восточной Азии и Центральной Азии отмечается рост заболеваемости. В Монголии ежегодно регистрируется заболеваемость сельскохозяйственных животных и людей сибирской язвой. В РФ неблагополучны по сибирской язве Южный, Сибирский Федеральные округа. Заболевание людей чаще носит случайный характер и возникает в бытовых условиях (непрофессиональный тип заражения).

Диагностика. Бактериоскопия препаратов, окрашенных по Граму и с помощью флюоресцирующей специфической антисыворотки мазков, приготовленных из содержимого везикул, карбункулов, мокроты, крови, испражнений, ликвора.

Бактериологический метод – посев на питательные среды. На агаре возбудитель образует серовато-белого цвета колонии с выростами в форме запятой («голова медузы»). Колонии отличаются липкостью и способностью принимать горизонтальное положение (вид сталактитов) при взятии их петлей.

Материал для исследований:

- при кожной форме – содержимое везикул, пустул, отделяемое язв, карбункулов;

- при лёгочной форме – мокрота, плевральная жидкость;

- при кишечной форме – испражнения и рвотные массы больного;

- при септической форме – ликвор;

- при всех формах – кровь.

Биологическая проба – внутрибрюшинное заражение морских свинок.

Серологические методы исследования – реакция преципитации и иммуноферментный метод. Диагностический титр – 1:200.

Реакция кольцепреципитации по Асколи. Сырье животного происхождения (шерсть, волосы, шкуры) в количестве не менее 20–30 г. Данный метод обследования проводится в очаге с целью установления источников и причин заражения больного.

Кожно-аллергическая проба с антраксином – вспомогательный метод. Постановка проводится в том случае, если заболевший не был привит против сибирской язвы в течение предшествующих 12 мес.

На 1-ой неделе заболевания проба бывает положительной в 85-90% случае. Препарат вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья в объеме 0,1 мл. Результат учитывают через 24 и 48 ч. Положительной считается реакция при наличии гиперемии и инфильтрата свыше 10 мм в диаметре при условии, что они не исчезли через 48 ч.

Специфическая профилактика. Лицам, подвергающимся опасности заражения сибирской язвой (работникам предприятий по переработке кожевенного сырья и шерсти, мясокомбинатов, ветеринарным работникам, работникам лабораторий, работающим с возбудителем сибирской язвы), проводят профилактические прививки сибиреязвенной живой сухой вакциной для накожного и скарификационного применения (СТИ).

Экстренная профилактика – антибиотики. Менее предпочтительно использование специфического сибиреязвенного иммуноглобулина.

Для лечения используется специфический противосибиреязвенный иммуноглобулин, который вводят внутримышечно в дозе 20–80 мл/сут (в зависимости от клинической формы и тяжести болезни) после предварительной десенсибилизации (в/в введение преднизолона) и проведения пробы по Безредко: при легкой форме – 20 мл/сут, при тяжелых и среднетяжелых – 40–80 мл/сут.

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Характеристику биологических свойств возбудителя сибирской язвы

2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при сибирской язве

3. Принципы лабораторной диагностики сибирской язвы

4. Препараты для идентификации, лечения и профилактики сибирской язвы

Уметь:

1. Дифференцировать возбудителя сибирской язвы по морфологическим признакам в микропрепарате

2. Оценивать реакции термопреципитации по Асколи с целью выявления сибиреязвенного антигена

3. Классифицировать бактериальные препараты в соответствии с их назначением

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЕНСО (Enteric Cytopathogenic Human Orfhan ) – кишечные

цитопатогенные человеческие сиротки

Ig A, M, G, E, D – иммуноглобулины А, М, G, E, D

МНС (HLA), ГКГС – major histocompatibility complex, главный

комплекс гистосовместимости

МТС-Х – микротест-система для ускоренного определения групп

вибрионов по Хейбергу

MTC-V – микротест-система для биохимической идентификации

вибрионов

БГКП – бактерии группы кишечной палочки

БОЕ – бляшкообразующая единица

ВОЗ – всемирная организация здравоохранения

ГЦ – гуанин-цитозин ДНК

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота

ЖСА – желточно-солевой агар

ИФА – иммуноферментный анализ

КОЕ – колониеобразующая единица

КС – клеточная стенка

ЛПС – липополисахариды

ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение

МБК – минимальная бактерицидная концентрация

МПА – мясо-пептонный агар

МПБ – мясо-пептонный бульон

МПК – минимальная подавляющая концентрация

МФА – метод флуоресцирующих антител

НВЧ – наиболее вероятное число

ОКСИ-тест

ОМЧ – общее микробное число

ПАБ-1 – пробоотборник аэрозольный бактериологический

ПСЛ – показатель специфического лизиса лейкоцитов

ПУС – полиуглеводные среды

ПЦР – полимеразно-цепная реакция

РА – реакция агглютинации

РНАг – реакция нейтрализации антигена

РНАТ – реакция нейтрализации антител

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации

РНИФ – реакция непрямой иммунофлуоресценции

РНК – рибонуклеиновая кислота

РПГА – реакция пассивной гемагглютинации

РСК – реакция связывания комплемента

РТМЛ – реакция торможения миграции лейкоцитов

СИБ – система индикаторная бумажная

СПИД – сидром приобретенного иммунодефицита

СПМО – санитарно-показательные микроорганизмы

СТИ – санитарно-технический институт

СЭДХ – среда элективная дифференциальная для холерных

вибрионов

TCBS – тиосульфат-цитратный агар с бромтимоловым синим и сахарозой (элективная питательная среда для холерных

вибрионов)

УФЛ – ультрафиолетовые лучи

ЦПМ – цитоплазматическая мембрана

Библиографический список

Основной

1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология // М.: Медиц. информ. агенство, 2002, 736 с.

2. Борисов Л.В., Кузьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С., Федорова З.В. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии // М.: Медицина, 1994, 252 с.

3. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 288 с.

4. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1983, 512 с. с илл.

5. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология // Санкт-Петербург: Спец. Литература, 2000, 591 с.

6. Поздеев О.К. Медицинская микробиология // М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, 768 с.

7. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология // М.: Медицина, 1980, 512 с.

8. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология // М.: Медицина, 1994, 528 с.

9. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.: ил.

Дополнительный

1. Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. – Москва: ГЭОТАР-МЕД, 1998, 200 с.

2. Букринская А.Г. Вирусология // М.: Медицина, 1986, 336 с.

3. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии // Под ред. В.В.Теца.-М.: Медицина, 2002, 352 с.

4. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А.Воробьева, А.С.Быкова – М.: Медицинское информационное агентство, 2008. – 236 с.; ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ТЕМА	стр.
Правила техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены в микробиологической лаборатории	3
ЗАНЯТИЕ 1. ТЕМА. Правила работы в баклабораториях. Микроскоп. Работа с иммерсионной системой. Основные формы бактерий. Простые и сложные методы окраски. Методы микроскопического изучения микроорганизмов. Систематика и классификация микроорганизмов.	5
ЗАНЯТИЕ 2. ТЕМА. Ультраструктура бактериальной клетки. Строение бактериальной клетки. Нуклеоид. Клеточная стенка. Капсула. Методы исследования структурных подразделений клетки	14
ЗАНЯТИЕ 3. ТЕМА. Ультраструктура бактериальной клетки. Споры. Включения, Жгутики. Методы исследования структурных подразделений клетки. Сложные методы окраски: Ожешко (Ганзена), Нейссера, Циля-Нильсена.	18
ЗАНЯТИЕ 4. ТЕМА. Спирохеты. Классификация, морфология. Ультраструктура спирохет. Микроскопические методы исследования спирохет. Темное поле.	20
ЗАНЯТИЕ 5. ТЕМА. Риккетсии, хламидии вирусы. Классификация, морфология, ультраструктура. Физиология риккетсии, хламидии, вирусов. Типы культуры ткани.	23
ЗАНЯТИЕ 6. ТЕМА. Грибы, их классификация, морфология. Методы изучение грибов. Морфология актиномицетов. Химический состав и метаболизм бактерий. Термостат. Питательные среды.	32
ЗАНЯТИЕ 7. ТЕМА. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий. Этапы выделения чистой культуры методом механического разобщения. Исследование колоний.	43
ЗАНЯТИЕ 8. ТЕМА. Методы выделения чистых культур (продолжение). Ферментативная активность бактерий и методы ее изучения	48
ЗАНЯТИЕ 9. ТЕМА. Методы выделения чистых культур. Дыхание бактерий. Методы культивирования и выделения анаэробных бактерий. Рост и размножение микроорганизмов	54
ЗАНЯТИЕ 10. ТЕМА. Распространенность микробов в природе. Микрофлора воды. Микрофлора воздуха. Понятие о микробном числе, титре, индексе.	59
ЗАНЯТИЕ 11. ТЕМА. Действие факторов внешней среды на микроорганизмы. Дезинфекция. Стерилизация.	70
ЗАНЯТИЕ 12. ТЕМА. Генетика микроорганизмов. Мутации. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция. Бактериофаги.	81
ЗАНЯТИЕ 13. ТЕМА. Генетические рекомбинации: конъюгация. Плазмиды, их свойства, классификация. Мигрирующие генетические элементы (инвертированные последовательности, интегроны, транспозоны). Биотехнология.	90
ЗАНЯТИЕ 14 ТЕМА. Симбиоз и антагонизм. Про - и пребиотики. Антибиотики. Фитонциды	93
ЗАНЯТИЕ 15. ТЕМА. Учение об инфекции. Формы инфекции. Понятие о патогенности и вирулентности. Измерение силы вирулентности. Факторы вирулентности. Экспериментальная инфекция как метод выделения чистых культур.	98
ЗАНЯТИЕ 16. ТЕМА. Возбудители особо опасных и зоонозных инфекций. Морфология, биология, культуральные свойства Vibrio cholerae. Методика взятия материала от трупа. Транспортировка материала. Методика посева рвотных масс и испражнений на элективные среды. Методы идентификации холерных вибрионов. Бактериологический диагноз холеры. Возбудители зоонозных инфекций: Yersinia pestis. Морфология, биология, культуральные свойства возбудителя чумы. Лабораторный диагноз чумы. Специфическая профилактика чумы.	106
ЗАНЯТИЕ 17. ТЕМА. Возбудители зоонозных заболеваний: Francisella tularensis, Brucella, Bacillus anthracis. Морфология, биология, культуральные свойства возбудителей туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы. Лабораторный диагноз туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы. Специфическая профилактика туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы.	126
Список сокращений	140
Библиографический список	141

36