Вопросы для обсуждения

1. Общая характеристика патогенных кокков.

2. Морфология, тинкториальные и культуральные свойства стафилококков.

3. Токсины и ферменты "агрессии".

4. Классификация стафилококков.

5. Способы обнаружения токсинов и ферментов "агрессии".

6. Лабораторная диагностика.

7. Препараты, применяемые для специфического лечения и профилактики стафилококковых заболеваний.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомиться со схемой исследования при кокковых заболеваниях по таблице.

2. Микробиологический диагноз стафилококковых и стрептококковых заболеваний:

- изучить демонстрационный препарат из чистых культур стафилококков, стрептококка; зарисовать;

- изучить рост стафилококка на кровяном агаре, желточно-солевом агаре и МПБ, рост стрептококка на кровяном МПА и на МПБ;

- сделать посев гноя на чашку с кровяным МПА;

- изучить демонстрационный посев гноя на кровяном агаре;

- приготовить мазок из гноя, окрасить по Граму, зарисовать;

- сделать посев гноя на сахарный МПБ для определения чувствительности микрофлоры к антибиотикам;

- определить чувствительность к антибиотикам по демонстрационным посевам;

- посмотреть демонстрацию методики посева крови на сепсис;

- учесть результаты реакции плазмокоагуляции;

- познакомиться с исследованием пищевого продукта на наличие патогенных стафилококков – демонстрация преподавателем техники приготовления суспензии из исследуемого продукта (творога) и посева на чашки с кровяным МПА и желточно-солевым МПА;

- изучить препараты, применяемые для диагностики и лечения кокковых заболеваний.

Протокол исследования гноя

Цель исследования	Ход исследования	Результат
1	Приготовление, окраска по Граму и микроскопия мазков из гноя. Посев гноя на молочно-солевой агар, на желточно-солевой агар, на кровяной агар.
2	Микроскопия мазков из колоний. Посев материала из колоний на сахарный агар газоном и определение чувствительности к антибиотикам методом дисков. Посев материала из колоний на скошенный агар.
3	Пересев со скошенного агара на плазму и на маннит. Провести фаготипирование.

Заключение:

Из гноя больного ________________________________________________

выделен ________________________________________________________

с наибольшей чувствительностью к ________________________________

фаготип________________________________________________________

Стрептококковые инфекции

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа стрептококковых инфекций.

Задачи:

1. Знать основных возбудителей стрептококковых инфекций.

2. Изучить патогенетические факторы микроорганизмов.

3. Ознакомиться с методами лабораторной диагностики.

Уметь:

 интерпретировать полученные результаты лабораторного анализа гнойных стрептококковых заболеваний,

 оценить результаты антибиотикограмм и факторов персистенции,

 подобрать препараты для специфической профилактики и терапии данных болезней.

Род Streptococcus объединяет обширную, широко распространенную в природе группу грамположительных, факультативно анаэробных микроорганизмов. Облигатно-патогенным для человека видом является S. pyogenes (группа А), являющийся причиной возникновения гнойно-воспалительных процессов различной локализации. S. pneumoniae – пневмококк является возбудителем острых пневмоний, часто сопровождающихся бактериемией, менингитов у детей, острых отитов, гнойных конъюнктивитов и др. Среди многочисленных условно-патогенных для человека видов стрептококка лидирующее место занимает S. agalactiae (группа В), S. faecalis и S. faecium (группа Д).

Раздел	Вопросы для изучения
Биология возбудителя	1. Taкcoнoмия Возбудители стрептококковых инфекций относятся к семейству streptococcaceae, роду Streptococcus. Этот род включает в себя несколько десятков видов, которые подразделяются на: А. β-гемолитические; Б. α-гемолитические; В. α1-гемолитические; Г. γ-негемолитические стрептококки.
	2. Основные биологические cвойства: Морфологические – кокки с диаметров клеток 0,6-1,0 мкм, располагающиеся в виде цепочек различной длины. Спор не образуют, патогенные виды образуют капсулу. Тинкториальные – грамположительные клетки. Культуральные: факультативные анаэробы, температурный оптимум – 37°С, оптимальная реакция питательной среды при pH=7,2-7,6. На обычных питательных средах не растут, или растут очень скудно. На бульоне рост придонно-пристеночный в виде крошковатого осадка, бульон прозрачен. Для культивирования стрептококков используют кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови. На плотных питательных средах стрептококки группы А образуют колонки 3-х типов: мукоидные, шероховатые, гладкие. Биохимические свойства: ферментируют глюкозу, мальтозу, сахарозу до кислоты, без образования газа. Молоко не свертывают. Протеолитическими свойствами не обладают, каталазонегативные. Патогенность I. Факторы адгезии: а) белок М – главный фактор патогенности, представляющий собой фибриллярные молекулы, которые образуют фимбрии на поверхности клеточной стенки стрептококков группы А. б) капсула, состоящая из гиалуроновой кислоты, маскирующая стрептококк от фагоцитов. II. Токсины и ферменты агрессии: гемолизин О (стрептолизин), гемолизин S, стрептокиназа, гиалуронидаза, ДНК-аза, аминопептитаза. Антигенные свойства: В настоящее время выявлено 20 серогрупп стрептококков, в зависимости от группоспецифичных полисахаридных антигенов, локализованных в клеточной стенке. Помимо общего для всего роде антигена и группоспецифичных у гемолитических видов обнаружены типоспецифические антигены: M, T и R, а также перекрестно реагирующие антигены.
Эпидемиология	Стрептококки являются постоянными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей, пищеварительного тракта. Источником экзогенной инфекции служат больные острыми стрептококковыми болезнями (ангина, скарлатина), а также реконвалесценты после них. Основной способ заражения – воздушно-капельный, в других случаях – прямой контакт, и очень редко – алиментарный.
Патогенез	Проникнув через поврежденную кожу микробы распространяются из местного очага через лимфатическую и кровеносную системы. Заражение воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем приводит к поражению лимфоидной ткани (тонзиллиты), в процесс вовлекаются регионарные лимфоузлы, откуда возбудитель распространяется лимфогенно и гематогенно. Стрептококки могут вызывать самые различные заболевания: раневые инфекции, рожистое воспаление, пуэрперальный сепсис, инфекции дыхательных путей. Сенсибилизирующие свойства микробов определяют такие осложнения как нефрозонефриты, артриты, поражение сердечно-сосудистой системы, ревматизм.
Постинфекци-онный имму- нитет	После перенесенного заболевания формируется антитоксический и антимикробный иммунитет, который носит прочный и длительный характер

Этиотропная терапия. Стрептококки сохраняют чувствительность к бета-лактамным антибиотикам, которые относят к препаратам выбора при лечении стрептококковых инфекций. Для профилактики скарлатины контактным лицам эффективно используется человеческий нормальный иммуноглобулин.

Схема лабораторной диагностики гнойных стрептококковых инфекций

Материал	Метод исследования	Результат
Слизь из зева, с миндалин, отделя-емое ран	1. Микроскопический 2. Бактериологический посев на 5% кровяной агар А. Микроскопия мазков из колонии Б. Выделение чистой культуры Установление принадлежности культуры к роду Streptococcaceae Микроскопический Культуральное определение Биохимическая активность (среды Гисса) Каталазный тест Определение признаков патогенности: 1. Гемолизин 2. Стрептокиназа 3. Гиалуронидаза 4. ДНК-аза	Гр+ кокки Рост колоний с зоной гемолиза Гр+ кокки Цепочки кокков Гемолитические колонии Ферментация до кислоты Каталазонегативные

Идентификация стрептококков

Целью первичной идентификации является установление принадлежности выделенной культуры к семейству Streptococcaceae и роду Streptococcus. Для установления принадлежности культур к семейству Streptococcaceae используют тест на каталазу.

В отличие от родственного семейства микрококков представители семейства стрептококков не имеют фермента каталазы, и не способны расщеплять перекись водорода с образованием воды и газообразного кислорода.

Установление принадлежности культур к роду Streptococcus

На этом этапе исследования применяют методы, позволяющие идентифицировать стрептококки. К их числу относятся бактериоскопический, культуральный и биохимический методы.

Бактериоскопический метод

В мазках, окрашенных по Граму, стрептококки располагаются цепочками, или по четыре. Размеры микробных клеток стрептококков 0,6-1, мкм. Грамположительные кокки.

Культуральный метод

По виду гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы: гемолитические стрептококки, обусловливающие лизис эритроцитов с образованием вокруг колоний прозрачной зоны. При этом колонии могут быть мукоидные, шероховатые, гладкие. Зеленящие стрептококки образующие на кровяном агаре альфа-реакцию в виде полупрозрачной, зеленоватого оттенка зоны, обусловленной превращением гемоглобина в мет-гемоглобин. Негемолитические стрептококки, не реагирующие с эритроцитами и в процессе своего роста не вызывающие изменений кровяного агара.

Видовая идентификация стрептококков

Культуры гемолитических и зеленящих стрептококков, клетки которых при микроскопическом исследовании представляют собой грамположительные полиморфные кокки, располагающиеся парами, короткими цепочками или небольшими скоплениями необходимо дифференцировать с энтерококками.

Для этого суточную бульонную культуру высевают на желчно-солевой агар и в молоко с 0,1% метиленового синего. На ЖЩА растут только энтерококки в виде круглых, блестящих колоний с ровным краем, синеватого цвета. В пробирках с молоком энтерококк редуцирует метиленовый синий, вследствие чего среда обесцвечивается и из голубой становится кремового цвета через 16-20 часов инкубации в термостате.

Способность микробных клеток к росту на ЖЩА. и редуцированию 0,1% метиленового синего в молоке указывает на принадлежность исследуемой культуры к группе энтерококков.

Дифференциация энтерококков внутри группы

Внутри группы энтерококки делятся по ферментативным, редуцирующим и гемолитическим свойствам на ряд видов и подвидов. Дифференциация культур энтерококка внутри групп ведется по следующей схеме:

Виды и подвиды	Резистен-тность к теллуриту каллия	Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда				Подви-жность в 0,2% агаре
		редукция ТТХ	гемолиз	протеолиз
1. S. faecalis 2. S. faecalis subsp. zymogenes 3. S. faecalis liquefaciens 4. S. faecium 5. Подвижные энтерококки	+ + + – +	+ + + – +	– + –  	–  + – –	– – – – +