Вопросы для обсуждения

1. Биология возбудителя кишечных эшерихиозов.

2. Эпидемиология, патогенез, клиника.

3. Микробиологическая диагностика.

4. Специфическое лечение и профилактика.

Самостоятельная работа

1. Используя демонстрационный материал провести 2-й и 3-й этапы бактериологического исследования испражнений для выделения возбудителя кишечного эшерихиоза.

2. Оценить результаты посева испражнений на среду Эндо. Результат записать в протокол.

3. Поставить РА с поливалентной ОК – сывороткой.

4. Используя демонстрацию, оценить результаты посева агглютинирующихся ОК – сывороткой, лактозоположительных колоний на среде Клиглера.

5. Определить серогруппу выделенной на среде Клиглера культуры диареегенной кишечной палочки.

Заключение:

Дизентерия (шигеллез)

Дизентерия - инфекционное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией организма, поносом и своеобразным поражением слизистой оболочки толстой кишки.

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа шигеллеза.

Знать:

- возбудителей дизентерии;

- биологию возбудителей дизентерии;

- эпидемиологию заболевания;

• лабораторную диагностику дизентерии;

Уметь:

- интерпретировать полученные результаты бактериологического анализа копрокультуры;

• оценить результаты антибиотикограмм;

• подобрать препараты для специфической профилактики и терапии данной болезни.

Шигеллы (род Shigella)

Род получил название по имени К. Шига, который в 1898 г. летально изучил микроб, известный в настоящее время под назва­нием S. dysenteriae, серовара 1.

Род Shigella включает 4 вида, которые различаются по биохими­ческим свойствам и антигенной структуре: S. dysenteriae - 12 сероваров; S. flexneri - 9 сероваров; S. Boydii - 18 сероваров; S. sonnei - 1 серовар.

Морфология. Шигеллы - неподвижные палочки размером 0,5-0,7х2-3 мкм, спор и капсулу не образуют.

Культуральные свойства. Хорошо культивируются на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие глад­кие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких - диффуз­ное помутнение. Жидкой средой обогащения является селенитовый бульон. У S. sonnei отмечена при росте на плотных средах S-, R-диссоциация.

Биохимические свойства. Шигеллы обладают слабой биохимиче­ской активностью по сравнению с родами Escherihia и Salmonella.

Основные биохимические признаки, необходимые для идентификации при выделении чистой культуры:

• не образуют газ при ферментации глюкозы;

• не расщепляют лактозу;

• не продуцируют сероводород.

S. dysenteriae не расщепляет маннитол. S. sonnei способен фер­ментировать лактозу медленно, в течение 72 ч.

Антигенная структура. Все шигеллы обладают соматическим О-антигеном, в зависимости от строения которого происходит под­разделение на серовары, a S. flexneri внутри сероваров подразделя­ется на подсеровары. Серовароспецифические О-антигены S. flexneri детерминируются конвертирующими бактериофагами. S. sonnei обладает антигеном фазы 1, который является К-антигеном.

Факторы патогенности. Вс вилы шигелл инвазируют слизистую оболочку толстой кишки с последующим межклеточным распро­странением. Эта способность связана с функционированием круп­ной плазмиды инвазии, которая имеется у всех 4 видов шигелл. Возбудители дизнтерии продуцируют экзотоксин – шигаподобный токсин. Эндотоксин защищает шигеллы от действия низких значений рН и желчи.

Патогенез и клиническая картина. Шигеллезы - это инфек­ционные заболевания, характеризующиеся поражением толстой кишки с развитием колита и интоксикацией организма. Заболе­вание характеризуется сложными начальными этапами патогенеза. Проникнув через М-клетки в подслизистую оболочку, шигеллы взаимодействуют с макрофагами, вызывая их апоптоз. В резуль­тате происходит выделение цитоксинов ИЛ-8, который иницииру­ет развитие воспалительного процесса в подслизистой оболочке и как следствие воспалительной диареи.

Апоптоз фагоцитов позволяет шигеллам проникнуть в эпители­альные клетки с базальной стороны. Межклеточное распространение шигелл приводит к развитию эрозий. При гибели шигелл происходит выделение шига- и шигаподобных токсинов, действие которых вызывает появление крови в испражнениях. Патологический процесс ограничивается толстой кишкой.

Этапы лабораторной диагностики

Первый день исследования

Испражнения наносят на питательную среду и растирают стерильным шпателем на небольшой площадке среды в чашке Петри, затем шпатель отрывают от агара и не прижимая его, продолжают растирать по остальной поверхности среды. Этим достигается равномерный рост колоний по всей поверхности. Засеянные чашки Петри в перевернутом виде помещаются в термостат при 37 (на 18-24 часа). На дне каждой чашки проставляют номер анализа.

Второй день исследования

Чашки с посевом просматривают невооруженным глазом. Просмотр чашек и отбор подозрительных колоний является одним из ответственных этапов бактериологического исследования. На среде Плоскирева дизентерийные бактерии растут в виде мелких, нежных, прозрачных колоний. Подозрительные колонии с чашек пересевают на короткий пестрый ряд для определения основных свойств культур. Короткий пестрый ряд может состоять из сред Гисса с лактозой, глюкозой маннитом и сахарозой (полужидких или жидких сред). В зависимости от характера ферментации ингредиентов среды (лактоза, глюкоза, маннит и др.) различными представителями бактерий кишечной группы наблюдается различное окрашивание среды. При отсутствии на чашке подозрительных колоний дается отрицательный ответ.

Третий день исследования

Изучение выделенных культур начинают с учета их ферментативной активности. Если все культуры от данного обследуемого сбраживают лактозу и глюкозу с газообразованием то, дается отрицательный ответ. Неподвижные культуры, не разлагающие лактозу и мочевину, и разлагающие ферментирующую глюкозу до кислоты без газа являются подозрительными на дизентерийную группу и подвергаются дальнейшему изучению. Культуры неподвижных грамотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу без газообразования, испытывают в опыте агглютинации на стекле с набором дизентерийных адсорбированных сывороток. Материалом для агглютинации является рост культуры на среде с мочевиной или на скошенном агаре. Вести испытание культур в реакции агглютинации на стекле рекомендуется сначала со смесью сывороток преобладающих видов (Флекснера, Зонне), а при наличии агглютинации со смесью сывороток – испытывают культуру отдельно с каждой из сывороток, входящих в данную смесь. Положительная реакция на стекле с типоспецифическими сыворотками является только ориентировочной, в связи с чем необходимо поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках до титра сыворотки указанного на этикетке, начиная с разведения 1:100 и физиологическом растворе. Контролем служат две пробирки: одна содержит взвесь микробов в физиологическом растворе (без сыворотки), другая – сыворотку в наименьшем разведении (без микробных тел). Все пробирки помещают в термостат при 37 ^оС до следующего дня.

Четвертый день исследования

Отмечают изменения во всех углеводных средах, образование индола, сероводорода, учитывается подвижность, каталазная проба. В этот же день учитывают результаты пробирочной реакции агглютинации. Основание для выдачи положительного ответа является обнаружение неподвижной грамотрицательной палочки, не сбраживающей лактозу и не образующей сероводород, ферментирующей глюкозу до кислоты. При этом обязательно указывают вид и тип выделенного штамма.