Вопросы для обсуждения

1. Морфологические, тинкториальные, культуральные свойства гонококков.

2. Токсины и ферменты агрессии.

3. Заболевания человека, вызываемые гонококками.

4. Лабораторная диагностика острой гонореи.

5. Лабораторная диагностика хронической гонореи.

6. Лабораторная диагностика бленнореи.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомиться со схемой исследования при гонококковых инфекциях.

2. Микробиологический диагноз гонококковых заболеваний.

Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций

Цель занятия: овладеть навыками микробиологической диагностики воздушно-капельных инфекций.

Знать:

- основных возбудителей бактериальных воздушно-капельных инфекций;

- патогенез заболевания, методы лабораторной диагностики.

Уметь:

- интерпретировать результаты лабораторных исследований;

- подобрать препараты для специфической профилактики и терапии указанных заболеваний.

Возбудители инфекций, передающихся воздушно-капельным путем, относятся к различным семействам, родам и видам микроорганизмов, которые отличаются друг от друга по морфологии, культуральным и биохимическим признакам и антигенной структуре.

Этиологически воздушно-капельные инфекции обусловливают стафилококки, стрептококки, клебсиеллы, коринебактерии дифтерии, бордетеллы коклюша, актиномицеты и др. они имеют одинаковый путь передачи, локализуются в эпителии дыхательных путей, но при этом вызывают избирательное поражение других органов и тканей.

Для микробиологического подтверждения диагноза используются, главным образом, бактериоскопический и бактериологический методы, иногда – биологические пробы на животных и аллергический метод.

В данном методическом пособии рассмотрены биология возбудителя, патогенез и методы лабораторной диагностики наиболее важных воздушно-капельных инфекций (дифтерия, коклюш, туберкулез).

Дифтерия

Это острое инфекционное заболевание, которое характеризуется общей интоксикацией организма с поражением периферической нервной системы, миокарда, надпочечников и воспалительным процессам в месте внедрения микроба с образованием фибринозных пленок.

Раздел	Вопросы для изучения
Биология возбудителя	Таксономия. Возбудители дифтерии относятся к роду Corynebacterium, который включает виды: а) Corynebacterium diphtheriae – возбудители дифтерии у человека. Возбудитель включает варианты: gravis, mitis, intermedius. б) Corynebacterium ulcerans – возбудители мастита у коров, могут вызывать ангины у людей. в) Corynebacterium xerosis, Hoffmani – дифтероиды, ложнодифтерийные палочки – непатогенны для человека, вегетируют на коже и слизистых оболочках здоровых людей. Основные биологические свойства: Морфологические – длинные, тонкие палочки с утолщениями на концах, в которых располагаются зерна волютина. В мазках из чистой культуры располагаются под углом друг ко другу. Спор, капсул не образуют, неподвижны. Тинкториальные: Гр+, специфической является окраска по Нейссеру. При этом палочка окрашивается в желтый цвет, зерна волютина – в черный или темно-синий. Культуральные: факультативные анаэробы, на простых средах не растут. Культивируются на сложных среда, содержащих сыворотку, кровь, теллурит калия. (Среда Ру – свернутая лошадиная сыворотка, среда Лефлера – 3 части бычьей сыворотки и 1 часть сахарного бульона, теллуритовая среда (Клауберга II), хинозоловая (Бучина). На сывороточных средах мелкие, выпуклые, кремового цвета колонии разной формы в зависимости от варианта: на хинозоловых -–голубого цвета, на Клауберга колонии var.gravis образует крупные серые с неровным краем колонии, mitis – мелкие, влажные, выпуклые черного цвета. Биохимические: все три варианта расщепляют глюкозу, мальтозу до кислоты, ферментируют цистин, не образуют уреазу. Крахмал и гликоген ферментирует только вариант – gravis. Антигенная структура: имеют группоспецифический соматический антиген и типоспецифический протеиновый поверхностный К-антиген е) патогенность: продуцируют экзотоксин (гистотоксин) белковой природы, который является продуктом незавершенного синтеза цитохрома. Легко проникает через мембраны клеток, оказывает избирательное действие – вызывает отек и некроз тканей в месте введения, поражает миокард, надпочечники и нервную систему. Экзотоксин состоит из двух компонентов А и В. А – собственно экзотоксин; В – комплекс токсинов: гемолизин и некротоксин, фибринолизин. Ферменты агрессии: гиалуронидаза, нейраминидаза.
Эпидемиоло- гия, патогенез заболевания	Источник инфекции – больной, бактерионоситель. Пути передачи – воздушно-капельный, контактный, редко алиментарный. Патогенез. Входные ворота: слизистые оболочки зева, носа, трахеи, глаз, раневая поверхность. Возбудитель остается на слизистых оболочках, размножается, выделяет экзотоксин, который поступает в кровь и разносится по организму – токсинемия. Местно вначале действует фракция В, которая некротизирует клетки слизистой, вызывает дифтеритическое воспаление и способствует проникновению в клетки фракции А. Фракция А нарушает внутриклеточный обмен в клетках миокарда (миокардиты), нервных клеток (полиневриты), надпочечников и паренхиматозных органов (токсический нефроз) и др. на миндалинах образуются грязно-белые налеты (пленки), которые снимаются шпателем с трудом, и развивается отек. Фибринозное воспаление и отек иногда приводит к развитию асфиксии.

Схема лабораторной диагностики при дифтерии

Материал	Метод исследования	Результаты
Слизь из зева и носа, пленки, налеты с миндалин	Бактериоскопический. Материал берут двумя стерильными ватными тампонами, один используют для приготовления микропрепарата, другой для посева. Мазки окрашивают по Нейсеру и метиленовым синим. Метод имеет ориентировочное зна-чение. Бактериологический. Материал засевают на одну из из элективных сред: сывороточную Клауберга II хинозоловую. На этих средах задерживается рост кокков и др. микрофлоры зева. На второй день из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают по Нейссеру и отсевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры. На третий день проводят идентификацию чистой культуры по следующим тестам: Определение токсигенности методом диффузной преципитации в агаре; Определение фермента цистиназы (проба Пизу); Определение уреазной активности – посев в среду с мочевиной и индикатором крезолрот (проба Закса). На этом этапе дают положительный ответ, но исследование продолжают. Посев на углеводы: глюкозу, мальтозу, крахмал, гликоген. Выдача окончательного ответа.	Коринебактерии дифтерии располагаются под углом друг к другу в виде буквы «V» зерна волютина находятся по полюсам палочек. При окраске по Нейссеру тело палочки окрашивается в желтый цвет, а зерна волютина в черный цвет. Дифтероиды не имеют зерен волютина, а сами палочки расположены параллельно. На свернутой сыворотке мелкие круглые колонии кремового цвета с уплотнением в центре. На среде Клауберга тип gravis образует крупные с радиальной исчерченностью серого цвета колонии; тип – mitis круглые, выпуклые колонии черного цвета. Исследуемая культура образует линии преципитации в агаре. Расщепляет цистин – по ходу укола почернение среды. Не образует уреазу – среда не изменяет цвет. Дифтероиды выделяют уреазу, среда с мочевиной окрашивается в розовый цвет. Тип gravis расщепляет глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген до кислоты, тип mitis полисахариды не ферментирует.

Определение токсикогенности дифтерийных коринебактерий

Токсигенность определяют методом диффузной преципитации в агаре по Оухтерлони. Для этого на чашку с сывороточным агаром накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную дифтерийной антитоксической сывороткой. Рядом с полоской бумаги засевают выделенную культуру в виде «бляшек». Если культура токсигенна, то через 24-48 часов диффундирующий в питательную среду токсин и антитоксическая сыворотка образуют линии преципитации белого цвета.