Выделение и идентификация возбудителей

Для выделения используют жидкие и плотные среды. Идентификацию микроорганизма осуществляют набором стандартных тестов (подвижность, серологические реакции и др.). Жидкие среды (обычно Кйтта-Тароцци). Используют для накопления возбудителей. С жидких сред проводят пересев на плотные среды. При подозрении на смешанную флору исследуемый материал разделяют на две части. Одну засевают на жидкие среды без прогревания, а вторую прогревают после посева, что позволяет выделить клостридии из термоустойчивых спор. Плотные среды. Наибольшее распространение нашли агар Цёйсслера, КА с бензидином и среда Уйлсона-Блэра. На КА с бензидином колонии C. novyi быстро чернеют на воздухе. На среде Уйлсона-Блэра C. perfringens через 4-5 ч вызывает почернение столбика среды за счёт образования сульфида железа из Na₂S и FeCl₃, а также её разрывы вследствие образования

Пёретцу. Для этого в расплавленный и охлаждённый сахарный агар вносят культуру бактерий и заливают под стекло, помещённое на пробковых палочках в чашку Пётри (рис. 15-3). Токсинообразование. Для обнаружения токсинов проводят заражение белых мышей вытяжкой из исследуемого материала, фильтратами бульонных культур или кровью больных. Идентификацию токсинов проводят в РН со специфическими антитоксическими антисыворотками.

Возбудитель столбняка

Столбняк - тяжёлое заболевание, опосредованное нейротоксическим действием бактериального экзотоксина. Возбудитель заболевания - C. tetani. Практически одновременно возбудитель открыли Н.Д. Монастырский (1883) и А. Николайер (1884). В чистой культуре бактерии впервые выделил Ш. Китазато (1889).

Эпидемиология

Естественный резервуар и источник инфекции - почва. Заражение человека - следствие бытовых и производственных травм, причём наиболее часто поверхностных, когда больной не обращается за медицинской помощью. Повышенную заболеваемость отмечают в регионах с тёплым климатом, создающим условия не только для длительного сохранения спор в почве, но и для их прорастания. Заболеваемость значительно возрастает во время военных действий. Основная группа риска в мирное время - работники сельского хозяйства (составляют 80-86% заболевших). Ежегодная смертность от столбняка превышает 100 000 человек.

Морфология и тинкториальные свойства

Вегетативные клетки. Грамположитель-ные палочки с закруглёнными концами длиной 4-8 мкм и толщиной 0,3-0,8 мкм. Подвижны (содержат 20 жгутиков и более, расположенных по периферии клетки). В мазках располагаются одиночно или цепочками.

Споры. Круглые, реже овальные, расположены терминально. Их диаметр в 2-3 раза превышает толщину бактерий, вследствие чего они напоминают «теннисные ракетки» или «барабанные палочки» (рис. 15-4). Споры устойчивы к химическим и физическим воздействиям; они выживают в течение 8-10 ч в 1% растворе сулемы и 5% растворе фенола, а также выдерживают кипячение в течение 0,5-1 ч.

Культуральные свойства

C. tetani - строгий анаэроб, отличается высокой чувствительностью к О₂. На МПА и

 

желатине возбудитель растёт медленно и образует тонкие прозрачные колонии двух типов: гладкие, прозрачные S-колонии и серовато-жёлтые, шероховатые R-колонии. S-колонии образуют отростки, придающие им паукообразную форму. Позднее отростки сливаются, образуя «сеточку» на поверхности среды (рис. 15-5). При посеве столбиком в полужидкий агар через 24-48 ч S-колонии имеют вид пушинок с плотным коричневым центром; R-колонии имеют вид чечевичек.

Антигенная структура

У C. tetani выявляют О- и Н-Аг. По жгутиковым Аг (H-Аг) выделяют 10 сероваров. Все серо-вары продуцируют идентичные по своим антигенным свойствам тетаноспазмин и тетанолизин.

Биохимические свойства

Большинство штаммов инертно к углеводам. C. tetani проявляет слабые протеолитические свойства и медленно расщепляет белки и пептоны до аминокислот. Последние разлагаются до угольной кислоты, водорода, аммиака, летучих кислот и индола. Бактерии образуют желатина-зу и рениноподобный фермент, опосредующий появление затемнённых зон вокруг колоний C. tetani на молочном агаре.

Патогенез поражений

Основные факторы патогенности - тетаноспазмин и тетанолизин. Действие этих токсинов на организм, в особенности тетаноспазмина, обусловливает развитие столбняка у человека и животных.

Тетаноспазмин - полипептид с дистантным механизмом действия, так как бактерии редко покидают пределы первичного очага инфицирования. Токсин фиксируется на поверхности отростков нервных клеток, проникает в них (за счёт лигандопосредованного эндоцитоза) и посредством ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС.

• Механизм действия связан с подавлением высвобождения тормозных нейромедиаторов (в частности, глицина и у-аминомасляной кислоты) в синапсах (токсин связывается с синапти-ческими белками синаптобревином и целлюбревином).

• Первоначально токсин действует на периферические нервы, вызывая местные тетанические сокращения мышц. Токсин появляется в культурах на 2-е сутки, достигая пика образования к 5-7 дню. Тетанолизин (тетаногемолизин) проявляет гемолитическое, кардиотоксическое и летальное действие. В патогенезе заболевания играет менее важную роль. Максимальное накопление токсина в культуре наблюдают уже через 20-30 ч; процессы его образования не связаны с синтезом тетаноспазмина.