Вопросы к лабораторной работе «Качественные реакции на отдельные ферменты»

1. К какому классу ферментов относится амилаза?

2. Какое вещество является субстратом амилазы слюны?

3. Скорость какой реакции ускоряет липаза?

4. К какому классу относится каталаза?

5. Какое вещество является субстратом каталазы?

Лабораторная работа № 5 количественное определение аскорбиновой кислоты

Аскорбиновая кислота в природе синтезируется всеми хлорофиллсодержащими растениями, пресмыкающимися и земноводными, многими млекопитающими. Человек, обезьяны, морские свинки в ходе эволюции утратили способность ее синтезировать. Аскорбиновая кислота (витамин С) относится к водорастворимым витаминам, может функционировать как промежуточный переносчик водорода при окислении некоторых органических кислот в процессе дыхания. Содержание этого витамина в растительных тканях служит показателем его восстановительной и общей физиологической активности. Определение содержания аскорбиновой кислоты основано на ее способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол. При титровании кислого раствора аскорбиновой кислоты индикатор переходит из окрашенной формы в бесцветную. Титруют до появления розового цвета, обусловленного избытком индикатора в среде.

Техника безопасности

1. Соблюдайте особую осторожность при работе с раствором трихлоруксусной кислоты.

Цель работы:Определить содержание витамина C

в пищевых продуктах

Реактивы: Растительный материал для анализа: картофель, лук, капуста, яблоко и другие; трихлоруксусная кислота (5%); 0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола (краска Тильманса).

Ход работы:

а) гомогенизация биоматериала и экстракция витамина С. 2 г растительного материала, растирают в фарфоровой ступке с 10 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты. Растирание продолжается 3-5 мин до получения однородной массы. Далее содержимое ступки с помощью воронки переводят в мерную колбу на 50 мл, при этом трихлоруксусной кислотой тщательно обмываются ступка и пестик, и доливают колбу до метки этой же кислотой. Мерную колбу закрывают пробкой и в течение 5 мин встряхивают. После этого содержимое колбы фильтруют в сухую колбу.

б) количественное определение витамина C в экстракте. Для определения содержания аскорбиновой кислоты берут в коническую колбочку 5 мл фильтрата и титруют из микробюретки раствором 0.001 н 2,6-дихлорфеноиндофенола до слабо-розового окрашивания, сохраняющегося в течение 20 секунд. Используют только свежеприготовленный раствор 2,6-дихлорфеноиндофенола, поскольку он неустойчив при хранении. Расчет содержания аскорбиновой кислоты (А) ведут по следующей формуле:

Х = (0,088^. А^. 50 ^. 100) / Б^. В = (мг %),

где Х - содержание аскорбиновой кислоты в мг %;

А - количество раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (в мл), пошедшее на титрование;

В - количество сухого вещества в г, взятое для анализа;

Б - количество вытяжки в мл, взятое для титрования;

50 - общее количество вытяжки в мл;

0,088 - количество аскорбиновой кислоты в мг, эквивалентное 1 мл 0,001н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола.