Вопросы к лабораторной работе «Количественное определение аскорбиновой кислоты»
К какой группе витаминов относится аскорбиновая кислота?
В чем заключается биохимическая функция большинства витаминов?
Какова биохимическая функция витамина С?
Содержание аскорбиновой кислоты в данной работе выражают в мг %. Что это означает?
Лабораторная работа № 6 Количественное определение углеводов
Цель работы: Определить содержание глюкозы в растительном объекте.
Принцип метода. Для определения содержания глюкозы в растительном объекте используют феррицианидный микрометод определения глюкозы по Хагедорну-Йенсену. Метод основан на реакции окисления глюкозы (и других углеводов) гексациано-(III) ферратом калия (красной кровяной солью) в слабощелочной среде. В этих условиях глюкоза окисляется до глюконовой кислоты, при этом гексациано-(III)феррат калия восстанавливается до гексациано-(II)феррата (желтой соли).
Вследствие обратимости этой реакции гексациано-(11)феррат калия переводят в нерастворимую соль K2Zn3[Fe(CN)6]2 действием сульфата цинка, при этом протекает реакция:
2К4Fe(CN)6 + 3ZnSO4 = K2Zn3[Fe(CN)6]2 + 3K2SO4
Гексациано-(111)феррат калия берут в избытке и неиспользованный остаток его определяют иодометрически в кислой среде.
2К3Fe(CN)6 + 2KJ = 2K4Fe(CN)6 + J2↑
Выделившийся йод оттитровывают тиосульфатом натрия (гипосульфитом):
J2 + 2Na2S2O3 = 2NaJ + Na2S4O6.
Ход работы. 250 мг растительного материала растирают с 20 мл дистиллированной воды и фильтруют. К 1 мл фильтрата добавляют 2 мл щелочного раствора 0,005 н красной кровяной соли и помещают в кипящую водяную баню на 15 мин для протекания реакции окислительно-восстановительной реакции.
Пробу охлаждают и определяют в ней остаток непрореагировавшей красной кровяной соли. Для этого добавляют 2 мл 3% СН3СООН и 3 мл тройного раствора, состоящего из NaCl и ZnSO4 (для связывания K4Fe(CN)6) и KI (для реакции с K3Fe(CN)6). Раствор желтеет, выделяется свободный йод, который сразу связывают крахмалом (появляется синяя окраска) и оттитровывают 0,005 н Na2S2O3 из микробюретки до исчезновения окраски.
Параллельно в другой пробирке проводят опыт с контрольной пробой, в которую вместо фильтрата берут 1 мл дистиллированной воды. Далее делают тоже, что с опытной пробой, кроме кипячения.
Расчет. Для расчета содержания глюкозы пользуются специальной таблицей (Табл.7), составленной для р-ра гипосульфита (0,005 н.).
Таблица 7.
Содержание глюкозы в 0,1 мл вытяжки, в мг
|
Na2S2O3, мл |
0,00 |
0,01 |
0,02 |
0,03 |
0,04 |
0,05 |
0,06 |
0,07 |
0,08 |
0,09 |
|
0,0 |
0,385 |
0,382 |
0,379 |
0,376 |
0,373 |
0,370 |
0,367 |
0,364 |
0,361 |
0,358 |
|
0,1 |
0,355 |
0,352 |
0,350 |
0,348 |
0,345 |
0,343 |
0,341 |
0,338 |
0,336 |
0,333 |
|
0,2 |
0,331 |
0,329 |
0,327 |
0,325 |
0,323 |
0,321 |
0,318 |
0,316 |
0,314 |
0,312 |
|
0,3 |
0,310 |
0,308 |
0,306 |
0,304 |
0,302 |
0,300 |
0,298 |
0,296 |
0,294 |
0,292 |
|
0,4 |
0,290 |
0,288 |
0,286 |
0,284 |
0,282 |
0,280 |
0,278 |
0,276 |
0,274 |
0,272 |
|
0,5 |
0,270 |
0,268 |
0,266 |
0,264 |
0,262 |
0,260 |
0,259 |
0,257 |
0,255 |
0,253 |
|
0,6 |
0,251 |
0,249 |
0,247 |
0,245 |
0,243 |
0,241 |
0,240 |
0,238 |
0,236 |
0,234 |
|
0,7 |
0,232 |
0,230 |
0,228 |
0,226 |
0,224 |
0,222 |
0,221 |
0,219 |
0,217 |
0,215 |
|
0,8 |
0,213 |
0,211 |
0,209 |
0,208 |
0,206 |
0,204 |
0,202 |
0,200 |
0,199 |
0,197 |
|
0,9 |
0,195 |
0,193 |
0,191 |
0,190 |
0,188 |
0,186 |
0,184 |
0,182 |
0,181 |
0,179 |
|
1,0 |
0,177 |
0,175 |
0,173 |
0,172 |
0,170 |
0,168 |
0,164 |
0,164 |
0,163 |
0,161 |
|
1,1 |
0,159 |
0,157 |
0,155 |
0,154 |
0,152 |
0,150 |
0,148 |
0,146 |
0,145 |
0,143 |
|
1,2 |
0,141 |
0,139 |
0,138 |
0,136 |
0,134 |
0,132 |
0,131 |
0,129 |
0,127 |
0,125 |
|
1,3 |
0,124 |
0,122 |
0,120 |
0,119 |
0,117 |
0,115 |
0,113 |
0,111 |
0,110 |
0,108 |
|
1,4 |
0,106 |
0,104 |
0,102 |
0,101 |
0,099 |
0,097 |
0,095 |
0,093 |
0,092 |
0,090 |
|
1,5 |
0,088 |
0,086 |
0,084 |
0,083 |
0,081 |
0,079 |
0,077 |
0,075 |
0,074 |
0,072 0,054 |
|
1,6 |
0,070 |
0,068 |
0,066 |
0,065 |
0,063 |
0,061 |
0,059 |
0,057 |
0,056 | |
|
1,7 |
0,052 |
0,050 |
0,048 |
0,047 |
0,043 |
0,042 |
0,041 |
0,039 |
0,038 |
0,036 |
|
1,8 |
0,034 |
0,032 |
0,031 |
0,029 |
0,027 |
0,025 |
0,024 |
0,022 |
0,020 |
0,019 |
|
1,9 |
0,017 |
0,015 |
0,014 |
0,012 |
0,010 |
0,008 |
0,007 |
0,005 |
0,003 |
0,002 |
Например, на титрование опытной пробы израсходовано 1,29 мл гипосульфита, на титрование контрольной пробы - 1,92 мл. По таблице: 1,29 мл соответствует 0,125 мг глюкозы, а 1,92 мл - 0,014 мг. Содержание глюкозы в 1 мл оттитрованной вытяжки = 0,125-0,014=0,111 мг.
Далее рассчитывают содержание глюкозы в 1 г растительного материала.