Инструкция к практическому занятию: “ Определение активности ферментов, исследование кинетики ферментативного катализа и влияния активаторов и ингибиторов“

Принцип работы:

Активаторы действуют на пространственную конфигурацию белковых молекул, помогая формированию активного центра и, тем самым, активируют фермент. В отличие от коферментов они не принимают непосредственного участия в реакции.

Активаторы некоторых ферментов : для амилазы слюны - хлорид натрия (NaCL), для пепсина- ионы водорода хлористоводородной кислоты, для липазы- желчные кислоты, для аденозинтрифосфатазы - ионы магния и марганца.

Ингибиторы также влияют на активный центр фермента, но при этом снижают каталитическую активность фермента. Нередко они являются конечными продуктами реакций какого либо биохимического процесса. Действие ингибиторов специфично для определенных ферментов или групп ферментов.

Материальное обеспечение: пробирки, 1% раствор крахмала, амилаза, 1% раствор NaCL, 1% раствор CuSO ₄ , реактив Люголя

Работа 1.

Ход работы:

Разводят 1 мл слюны в 10 раз. В три пробирки наливают по 1 мл предварительно разведенной слюны. По предложенной ниже схеме ставят опыт:

№№ Фермент Субстрат Исследуемое Количество

(амилаза), слюна 32 (р-р крахмала) соединение разв. 1:10

1. 1мл 1мл дист.вода 0,5мл

2. 1мл 1мл 1% NaCL 0,5мл

3. 1мл 1мл 1% CuSO ₄ 0,5мл

1. Все пробирки инкубируют 10 минут при температуре 25 градусов.

2. Определяют влияние исследуемых соединений на каталитическую функцию амилазы. Для этого проводят качественную реакцию на крахмал (субстрат). Во все пробирки добавляют по 1 капле реактива Люголя, содержащего йод, перемешивают, наблюдают окраску и определяют, в какой пробирке действует активатор или ингибитор. Целесообразно в каждую пробирку добавить до 2 мл дист. воды и перемешать. Окраска будет более наглядной.

ВЫВОДЫ:

Работа 2. Выполните лабораторную работу по индивидуальному заданию, полученному у преподавателя.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1

Граф логической структуры

СУБСТРАТ

Тема 1.4. Исследование роли кофакторов и коферментных форм витаминов в каталитической активности ферментов

Актуальность темы

Значение витаминов для нормальной жизнедеятельности организма не вызывает сомнений. Витамины являются составным компонентом сложных ферментов, образуя небелковую часть фермента – кофермент. Без кофермента сложный фермент не может функционировать, т.к кофермент, как правило, непосредственно контактирует с субстратом и является переносчиком электронов, атомов или групп атомов (аминогрупп, метильных групп и др.), тем самым участвуя в катализе определенных типов метаболических реакций. Знание коферментной функции витаминов необходимо для последующего изучения метаболизма органов и тканей в курсе биохимии, а также при изучении фармакологии, клинических и гигиенических дисциплин.Теперь ознакомьтесь с целями занятия.

Общая цель

Уметь обосновать биологическую функцию витаминов как структурных компонентов ферментов для использования на последующих кафедрах при объяснении нарушений метаболизма и их клинических проявлений при недостатке (избытке) витаминов в организме, а также для понимания принципов применения антивитаминов в лечебной практике.

. Конкретные цели: Цели исходного уровня:

Уметь:

1.Интерпретировать структуру витаминов и их коферментных форм.	1.Интерпретировать структуру мононуклеотидов, сложных эфиров (каф. медицинской и фармацевтической химии).
2.Анализировать причины нарушения синтеза коферментов.	2. Интерпретировать принцип метода определения пирувата в биологических жидкостях (каф. медицинской и фармацевтической химии).
3.Анализировать роль витаминов в обменных реакциях.	3. Интерпретировать принцип метода определения лактата в биологических жидкостях(кафедра медицинской и фармацевтической химии).
4.Интерпретировать метаболические нару- шения при отсутствии витаминов.
5.Интерпретировать конкурентное действие антивитаминов.

Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.

Задания для самопроверки и самокоррекции исходного уровня.

Задание 1. Студенту предложили синтезировать сложный эфир, предоставив следующие вещества: спирт, кислоту, альдегид, амин. Что он использовал, выполнив задание?

А. Кислоту и амин

В. Только кислоту

С. Только спирт

D. Спирт и альдегид

Е. Спирт и кислоту

Задание 2. Лабораторный анализ после гидролиза вещества выявил в гидролизате аденин, рибозу и фосфорную кислоту. Какой структуры исходное вещество?

А. Пептид

В. Нуклеозид

С. Мононуклеотид

D. Пентозофосфат

Е. Гликозаминогликан

Задание 3. Для определение пирувата его нужно превратить в гидразон по реакции:

СН₃ NH-NH ₂

I I NO₂

С=О + O₂ N

I → гидразон

СООН

Какими функциональными группами реагируют вещества?

А. -СООН группой пирувата и -NO₂ группой гидразина

В. О

II

-С- группой пирувата и -NO₂ группой гидразина

C. -СООН группой пирувата и -NН₂ группой гидразина

D. О группой пирувата и -NН₂ группой гидразина

II

-C-

Е. О группой пирувата и - группой гидразина

II

-С-