Инструкция к практическому занятию: «Количественное определение холестерина в крови и кетоновых тел в моче»

Работа 1. Реакция Либерманна – Бурхардта на холестерин

Принцип работы основан на способности раствора холестерина в хлороформе давать с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой зеленое окрашивание.

Материальное обеспечение: экстракт холестерина, уксусный ангидрид, концентрированная серная кислота, пипетки, пробирки.

Ход работы: к 1 мл хлороформного экстракта холестерина добавляют 10 капель уксусного ангидрида и 2 капли конц. серной кислоты, хорошо перемешивают и наблюдают зеленое окрашивание.

Работа 2. Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Принцип работы основан на реакции Либерманна – Бурхардта (см. выше).

Материальное обеспечение: сыворотка крови, уксусный ангидрид, концентрированная серная кислота, пипетки, пробирки, мерные цилиндры, термостат, ФЭК, кюветы.

Ход работы: на дно сухой мерной пробирки вносят 0,1 мл сыворотки крови. Отмеривают цилиндром 2,1 мл реактива 1 (смесь ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты) и переливают в пробирку с сывороткой, перемешивают, встряхивают и помещают в термостат при температуре 37 град. С на 20 минут (или при комнатной температуре). При этом развивается зеленое окрашивание. Затем фотометрируют на ФЭКе в кювете на 5 мм против воды при красном светофильтре. Для определения содержания холестерина по найденной оптической плотности пользуются готовым калибровочным графиком. Найденную концентрацию холестерина умножают на 1000, т.к. сыворотки в опыт берется 0,1 мл. Коэффициент пересчета в единицы СИ (ммоль/л) равен 0,0258.

Норма – 2,97 – 8,79 ммоль/л холестерина в сыворотке крови

Клинико-диагностическое значение.

Гиперхолестеринемия наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, гипотиреозе, механической желтухе. Гипохолестеринемия наблюдается при голодании, туберкулезе, гипертиреозе.

Работа 3. Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту

Проба Люголя на ацетон

Принцип работы. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание.

Материальное обеспечение: моча, 10% раствор щелочи, нитропруссид натрия, ледяная уксусная кислота, пробирки, пипетки.

Ход работы. В пробирку наливают 5 капель мочи, 5 капель 10% раствора щелочи и 5 капель свежеприготовленного нитропруссида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание, которое после добавления 10 капель ледяной уксусной кислоты переходит в вишнево – красное окрашивание.

Реакция Герхардта на ацетоуксусную кислоту

Принцип работы Ацетоацетат с хлорным железом при кипячении образует раствор вишнево-красного цвета.

Материальное обеспечение: моча, 5% раствор хлорного железа, пробирки, пипетки

Ход работы К 5 каплям мочи прибавляют по каплям 5% раствор хлорного железа. При этом выпадает осадок – сульфат фосфорно-кислого железа. При наличии ацетатоацетата от дальнейщего прибавления хлорного железа появится вишнево – красное окрашивание. При кипячении процесс протекает быстро.

Клинико-диагностическое значение.

Гиперкетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете, голодании, гиперпродукции гормонов – антагонистов инсулина.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1