Задание № 3

Составьте схему связи орнитинового цикла и цикла трикарбоновых кислот.

Задание № 4

Составьте схему глюкозо-аланинового цикла. В чем заключается роль аланина в обмене аммиака?

Инструкция к практическому занятию “Количественное определение мочевины в крови”

Принцип метода основан на разложении мочевины крови ферментом уреазой с последующим определением аммиака, образующегося в результате реакции, колориметрическим способом с использованием реактива Несслера.

Материальное обеспечение: сыворотка крови; 30% стандартный раствор мочевины , арбузные семечки, 7,5% раствор сульфата цинка; 1,5% раствор едкого натра; 0,2% раствор сегнетовой соли; реактив Несслера; дистиллированная вода; бумажные фильтры; водяная баня, термометр, настольная центрифуга.

Ход работы

1. В начале работы необходимо приготовить препарат уреазы. Для этого надо очистить 3-4 семечка арбуза от кожуры, и извлеченные зерна растереть в ступке, постепенно добавляя дистиллированную воду от 1 мл до 10 мл. Полученную эмульсию профильтруйте.

2. В две пробирки, опытную и стандартную, внесите по 1,5 мл дистиллированной воды.

3. Затем в опытную пробирку добавьте 0,1мл сыворотки крови, а в стандартную –

0,1 мл 30% раствора мочевины.

4. Далее в каждую из пробирок добавьте по 0,5 мл приготовленного Вами препарата уреазы.

5. Содержимое пробирок перемешайте и поместите на 20 минут в водяную баню при температуре 37 С.

6. По окончании инкубации охладите пробирки под проточной водой и добавьте в каждую пробирку по 0,2 мл 7,5% раствора сульфата цинка и по 0,2 мл 1,5% раствора щелочи. Тщательно перемешайте содержимое пробирок.

7. Далее пробирки необходимо центрифугировать в течение 10 минут до получения прозрачной надосадочной жидкости.

8. После центрифугирования из каждой пробы отберите в две чистые пробирки по 1,5 мл надосадочной жидкости.

9. Затем в каждую пробирку добавьте по 2,5 мл 0,2% раствора сегнетовой соли и по

0,5 мл реактива Несслера. Содержимое пробирок тщательно перемешайте.

10. Измерьте оптическую плотность опытного и стандартного растворов на ФЭКе при синем светофильтре в кювете шириной 5 мм против контрольного раствора (контрольный раствор готовят лаборанты).

Расчет содержания мочевины в сыворотке крови проводится путем решения пропорции:

Е_{опыт ----} Х мг% Е_{оп. х} 30 мг %

Е_{стандарт ----} 30 мг% , тогда Х = -----------------,

Е_ст.

где: Е_оп. - экстинкция опытной пробы;

Е_ст. - экстинкция стандартного раствора мочевины.

Пересчетный коэффициент в систему СИ равен 0,1665.

Содержание мочевины в сыворотке крови в норме составляет 3,33 – 8,32 ммоль/л.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1

Граф логической структуры