Работа і. Изучение коферментной функции витамина в1

Принцип метода: активность фермента пируватдекарбоксилазы устанавливается по убыли сустрата, количество которого определяется качественной реакцией.

Материальное обеспечение:

Апофермент декарбоксилаза

ТДФ

Буферный раствор рН 6,8

Динитрофенилгидразин

Штативы, пробирки, пипетки, термостат

Ход работы: в контрольную и опытную пробирки вносят следующие реагенты:

Содержание пробирок Контроль Опыт

1.Апофермент пируватдекарбоксилазы 0,5мл 0,5 мл

2.Тиаминдифосфат - 1,0

3.Буферный раствор рН 6,8 1,0 1,0

4.Пируват 1,0 1,0

Содержимое обеих пробирок инкубируют 15 минут при +37 град. С.

После инкубации выполняют качественную реакцию на пируват, добавляя:

5.Динитрофенилгидразин 1,0 1,0

Окраска растворов:

В присутствии пировиноградной кислоты появляется розовое окрашивание.

ВЫВОДЫ:

Работа іі «Изучение коферментной функции витамина рр»

Принцип метода: активность ферментов ЛДГ и пируватдекарбоксилазы определяется по убыли субстрата, об активности которого судят по качественной реакции.

Материальное обеспечение:

апофермент пируватдекарбоксилаза

ТДД, ПВК, буферный раствор рН 7,4

Динитрофенилгидразин

Пробирки, пипетки, штативы, термостат

Ход работы :

Содержание пробирок Контроль Опыт

1.Апофермент лактатдегидрогеназы 0,5 0,5

2.НАД - 1,0

3.Буферный раствор рН 7,4 1,0 1,0

4.Лактат 1,0 1,0

5.Бидистиллированная вода 1,0

Содержимое обеих пробирок инкубируют 15 минут при + 37 град С.

После инкубации выполняют качественную реакцию на лактат с реактивом Уффельмана.

Окраска растворов:

В обеих пробирках проводят реакцию Уффельмана на молочную кислоту.

Для этого вначале готовится реактив Уффельмана: к 20 кап. 1% раствора фенола необходимо добавить 1-2 капли раствора хлорного железа. Получается раствор, окрашенный в фиолетовый

цвет, - фенолят железа .

Раствор фенолята железа делят на две части. К одной из них приливают содержимое контрольной пробы, к другой – содержимое опытной пробы. В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую благодаря образованию молочнокислого железа.

ВЫВОДЫ:

Подрись преподавателя:

Приложение 1