Инструкция к лабораторной работе

Работа І. Ксантопротеиновая реакция на ароматические аминокислоты.

Принцип метода: при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой происходит нитрирование бензольного кольца циклических аминокислот. Образуется нитросоединение желтого цвета – динитротирозин, при подщелачивании которого образуется натриевая соль динитротирозина оранжевого цвета.

Материальное обеспечение: 1% раствор яичного белка, концентрированная азотная кислота, 10% раствор едкого натра, штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы: к 5 каплям раствора белка добавьте 3 капли концентрированной НNО₃ и осторожно прокипятите. В пробирке появится осадок желтого цвета. После охлаждения пробирки необходимо добавить к исследуемому раствору белкового гидролизата по каплям 10% раствор NаОН до появления оранжевого цвета (10 – 15 капель), что свидетельствует об образовании натриевой соли динитротирозина.

Работа ІІ. Реакция Миллона на тирозин.

Принцип метода: При добавлении к раствору белка реактива Миллона (раствор ртути в азотной кислоте с небольшим количеством NaNO₂) и при кипячении образуется кроваво-красный осадок ртутной соли динитротирозина благодаря наличию в тирозине фенольного ядра.

Материальное обеспечение: 1% раствор белка, реактив Миллона , 0,1% раствор фенола, штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы:

Возьмите две пробирки.

Налейте в 1-ю пробирку 5 капель 1% раствора яичного белка, во 2-ю – 5 капель 0,1%

раствора фенола.

В каждую пробирку добавьте по 3 капли реактива Миллона и осторожно нагрейте.

В пробирке с яичным белком появится кроваво-красное окрашивание, с фенолом –

розовато-красное.

Работа ІІІ. Реакция на аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу (реакция Фоля)

Принцип метода: Сульфгидрильные группы белков подвергаются щелочному гидролизу, в результате чего происходит отщепление серы в виде сульфида, который с плюмбитом дает черный (или бурый) осадок сульфида свинца.

Метионин, в отличие от цистеина, этой реакции не дает, так как сера в нем связана прочно.

Материальное обеспечение: 1% раствор яичного белка, реактив Фоля, штатив с пробирками, пипетки.

Ход работы: к 5 каплям белка добавьте 5 капель реактива Фоля. Прокипятите. Через 1-2 минуты после кипячения появляется черный (бурый) осадок сульфида свинца.

Работа ІУ. Качественное определение креатинина в моче.

Принцип метода: В щелочной среде моча при добавлении нитропруссида натрия приобретает красную окраску, которая переходит в желтую. Это объясняется образованием изонитрозокреатинина.

Материальное обеспечение: 10% раствор едкого натра, 5% раствор нитропруссида натрия, штатив с пробирками, колбочки, пипетки.

Ход работы: к 10 каплям мочи прибавить 1 каплю 5% раствора нитропруссида натрия, подщелочить 1-2 каплями 10% раствора NaOH. Моча приобретает красную окраску, переходящую в желтую.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1