D. Пиридоксина

Е. Цианкобаламина

Задача 2.У экспериментального животного на фоне внутривенного введения глюкозы

определили снижение активности ЦТК. Какое соединение является непосредственным

его ингибитором?

А. НАДН₂

В. НАДФ

С. НАДФ Н₂

D. НSКоА

Е. Ионы Са

Задача 3. У экспериментального животного исследовали влияние витаминов на скорость

ЦТК. Гиповитаминоз, какого витамина не влияет на скорость этого процесса?

А. Цианкобаламина

В. Тиамина

С. Пантотеновой кислоты

Д. Никотинамида

Е. Рибофлавина

Задача 4.Студенты в лабораторной работе in vitro исследовали действие малоната на ряд

ферментов аэробного окисления глюкозы. Накопление, какого метаболита ЦТК они обна-

ружили?

А. Малата

В. Цитрата

С. Лактата

D. Изоцитрата

Е. Сукцината

Задача 5. Механизм ЦТК организован таким образом, что в процессе окисления в тканевое

дыхание вовлекаются водороды воды. Укажите ферменты этого цикла, которые катализи-

руют присоединение воды к его метаболитам с последующим поступлением её водородов

в тканевое дыхание.

А. Цитратсинтаза

В. Кетоглутаратдегидрогеназа

С. Малатдегидрогеназа

D. Аконитатгидратаза

Е. Пируватдегидрогеназа

Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.

Эталоны ответов к решению целевых обучающих задач:

1 - С; 2 -А.

Краткие методические рекомендации к проведению заняття

На занятии проводится тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция. Проверяется выполнение домашнего задания. Затем студенты приступают к выполнению лабораторной работы, используя при этом инструкцию.

После выполнения лабораторной работы необходимо оформить протокол,сделать выводы к работе, которые проверяет и контролирует преподаватель.Проводится итоговый тестовый контроль по теме, подводятся итоги работы.

Инструкция к практическому занятию

Работа 1. Изучить функционирование ЦТК по убыли ацетил –КоА

Принцип метода: первым этапом ЦТК является реакция конденсации ацетил-КоА с оксалоацетатом, которая осуществляется цитратсинтазой. Образовавшаяся лимонная кислота подвергается превращению в цикле трикарбоновых кислот, а освободившийся КоА-SH можно определять, используя реактив Фолина (появляется синее окрашивание). Если блокировать ЦТК малоновой кислотой, то ацетил-КоА не используется и КоА-SH не образуется.

Материальное обеспечение:

Фосфатный буфер рН=7,4, раствор ацетил –КоА, раствор оксалоацетата, раствор малоновой кислоты, физиологический раствор, гомогенат митохондрий, реактив Фолина А, реактив Фолина В, пипетки, пробирки.

Ход работы:

Работу выполняют в 2-х пробирках (контроль и опыт) в соответствиии со схемой постановки:

№№ Содержимое пробирок Контроль Опыт

1. Фосфатный буфер рН=7,4 2,0 мл 2,0 мл

2. Р-р ацетил –КоА 0,5 0,5

3.. Р-р оксалоацетата 0,5 0,5

4. Р-р малоной кислоты 1,0 -

5. Физиологический р-р - 1,0

6. Гомогенат митохондрий 0,5 0,5

Инкубация 10 минут при комнатной температуре.

7. Реактив Фолина А 0,5 0,5

8. Реактив Фолина В 0,5 0,5

Результат (окраска растворов):

Выводы: 1. Напишите исследуемую реакцию ЦТК

2. Приведите реакцию ЦТК, которая ингибируется малоновой кислотой. Сравните формулы субстратов и малоната.

3. Определите тип ингибирования.

Работа 2. Изучить функционирование ЦТК по образованию углекислого газа

Принцип работы : при окислении ацетил-КоА в ЦТК образуется углекислый газ, который связывается гидроксидом кальция и определяется при добавлении серной кислоты по выделению пузырьков газа.

Материальное обеспечение:фосфатный буфер рН=7,4, раствор ацетил –КоА, раствор оксалоацетата, раствор малоновой кислоты, физиологический раствор, гомогенат митохондрий, раствор Са(ОН)_2, 0,1 н серная кислота, пипетки, пробирки.

Ход работы:

Работу выполняют в 2-х пробирках (контроль и опыт) в соответствиии со схемой постановки:

№№ Содержимое пробирок Контроль Опыт

пп___________________________________________________________________________

1. Фосфатный буфер рН=7,4 2,0 мл 2,0 мл

2. Р-р ацетил-КоА 0,5 0,5

3. Р-р оксалоацетата 0,5 0,5

4. Р-р малоновой кислоты 1,0 -

5. Физиологический р-р - 1,0

6. Р-р Са(ОН)₂ 1,0 1,0

7. Гомогенат митохондрий 0,5 0,5

Инкубация 10 минут при комнатной температуре.

8. 0,1 н.р-р серной кислоты 1,0 1,0

Результаты (выделение углекислого газа).

Выводы: 1. Напишите реакции ЦТК, которые сопровождаются выделением СО₂

Работа №3 Изучить функционирование ЦТК по образованию атомов водорода.

Принцип работы : При окислении ацетил-КоА в ЦТК образуется 8 атомов водорода, которые отщепляются при участии соответствующих дегидрогеназ, в качестве акцептора используется 2,6-дихлорфенолиндофенол (2,6-ДХФИ). Если цикл функционирует, то 2,6-ДХФИ восстанавливается и обесцвечивается.

Материальное обеспечение:

Фосфатный буфер рН=7,4, раствор ацетил –КоА, гомогенат митохондрий, раствор ЩУК, 0,001н раствор ДХФИ, бидистилят, пипетки, пробирки.

Ход работы:

Работу выполняют в 2-х пробирках (контроль и опыт) в соответствиии со схемой постановки:

№№ Содержимое пробирок Контроль Опыт

1. Фосфатный буфер рН=7,4 2,0мл 2,0мл

2. Р-Р ацетил-КоА - 0,5

3. р-р Щ У К - 0,5

4. Бидистиллят 1,0 -

5. 0,001 н. р-р ДХФИ 1,0 1,0

6. Гомогенат митохондрий 1,0 1,0

Инкубация 15-20 минут при комнатной температуре.

Результаты (окраска растворов).

ВЫВОДЫ:

1. Напишите дегидрогеназные реакции ЦТК, укажите ферменты и коферменты этих реакций.

Подпись преподавателя:

Приложение 1