Инструкция к практическому занятию «Кинетика действия панкреатической липазы»

Принцип работы: скорость действия липазы в отдельных порциях молока определяется по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира молока за определнный промежуток времени. Количество жирных кислот определяют титрованием щелочью.

Материальное обеспечение: молоко, вытяжка из поджелудочной железы, 0,5 % раствор фенолфталеина, 0,05н. раствор едкого натра, стаканы, колбы пипетки, пробирки, бюретки, штативы.

Ход работы :В два стакана наливают по 10 мл молока и по 1 мл вытяжки из поджелудочной железы. В один стакан приливают 1 мл воды, а в другой – 1мл желчи. Жидкость в стаканах быстро перемешивают. Из каждого стакана отбирают по 1мл смеси в колбу, добавляют 1-2 капли 0,5 % раствора фенолфталеина и титруют 0,05н.раствором едкого натра до слаборозовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд. Затем оба стакана с оставшейся смесью помещают в термостат при 37 град.С. Через каждые 10 минут из стакана отбирают по 1 мл смеси и титруют 0,05н.раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина до слаборозовой окраски. Проводят 5-6 таких определений и на основании полученных данных строят две кривые,отражающие процесс гидролиза жира под действием фермента липазы во времени и в зависимости от наличия или отсутствия желчи.

Результаты заносят в таблицу и представляют графически.

Время инкубации в минутах	Количество мл 0,05н. NаОН, пошедшего на титрование
	Проба с желчью		Проба без желчи
	Всего на пробу	Нейтрализовано жирными кислотами	Всего на пробу	Нейтрализовано жирными кислотами
0
10
20
30
40
50

График действия липазы во времени

Количество

мл 0,05 н NаОН,

пошедшего на 5

титрование

4

3

2

1

время в минутах

0 10 20 30 40 50

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1

Граф логической структуры

Тема 1.13. Исследование обмена жирных кислот и кетоновых тел. Бета-окисление жирных кислот.Биосинтез и трансформация холестерола

Актуальность темы

Холестерин широко распространен в природе и является частью пищи человека. В организме человека он выполняет ряд важных функций: структурную, служит предшественником в синтезе стероидных гормонов, витамина Д, желчных кислот. С нарушением обмена холестерина связаны такие болезни века, как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, желчекаменная болезнь. Поэтому понимание метаболизма, транспорта и регуляции обмена холестерина актуально при изучении этих заболеваний.

Одним из важных показателей жирового обмена является содержание кетоновых тел в крови, которые образуются в больших количествах при усиленном распаде триглицеридов. Их концентрация в крови повышается при сахарном диабете, голодании, приводя к развитию коматозного состояния.

В связи с вышеизложенным, определение кетоновых тел и холестерина в крови имеет большое значение для диагностики заболеваний, связанных с нарушением обмена триглицеридов и холестерина.

Теперь ознакомьтесь с целями занятия.

Общая цель

Уметь интерпретировать результаты определения концентрации холестерина в крови и кетоновых тел в моче для оценки состояния промежуточного обмена липидов с целью использования на клинических кафедрах при изучении заболевании, вызванных нарушениями метаболизма липидов.

Конкретные цели: Цели исходного уровня:

Уметь:

1.Интерпретировать энергетическую функцию липидов	1. Интерпретировать структуру триацилглицеридов как соединений, высоконасыщенных атомами водорода (кафедра медицинской и фармацевтической химии).
2.Анализировать наличие кетоновых тел в моче.	2 Интерпретировать свойства кетоновых тел как кислот (кафедра медицинской и фармацевтической химии).
3.Анализировать количественное содержание холестерина в крови.	3.Интерпретировать структуру холестерина как вторичного спирта -производного циклопентанпергидрофенантрена (кафедра медицинской и фармацевтической химии).
4. Интерпретировать патологические состояния, связанные с нарушениями метаболизма холестерина и кетоновых тел.

Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.

Задания для самопроверки и самокоррекции исходного уровня

Задание 1. Исследуемое вещество подвергли гидролизу и с помощью качественных реакций определили в гидролизате жирные кислоты и глицерин. Какое вещество исследовалось?

А. Холевая кислота

В. Триглицерид

С. Эфир холестерина

D. Фосфатидилхолин

Е. Холестерол

Задание 2. При гидролизе вещества образовались соединения, максимально насыщенные атомами водорода.. Какое вещество исследовалось?

А. Нуклеиновые кислоты

В. Триглицериды

С. Простые белки

D. Гликоген

Е. Крахмал

Задание 3. В исследуемой моче определили выраженную кислую реакцию за счет вещества, обладающего свойствами кетонов. Какое из перечисленных веществ может обусловить такое изменение рН мочи?

А. Ацетон

В. Янтарная кислота

С. Угольная кислота

D. Ацетоуксусная кислота

Е. Уксусная кислота

Задание 4. Какое из перечисленных соединений имеет в структуре кольцо циклопентанпергидрофенантрена?

А. Пирpол

В. Пиримидин

С. Холестерин

D. Пурин

Е. Тиазол

Задание 5. В моче больного с выраженной кислой реакцией определили содержание -гидроксибутирата. Из какого предшественника он может образоваться?

А. Из ацетона

В. Из ацетоуксусной кислоты

С. Из масляной кислоты

D. Из янтарной кислоты

Е. Из гамма-оксимасляной кислоты

Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.

Эталоны ответов к решению заданий для самопроверки и самоконтроля исходного уровня

1 - В, 4 - С.

Информацию для восполнения исходного уровня можно найти в следующей литературе:

1.Тюкавкина Н.А.,Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. М.: Медицина, 1991. – С. 486-488, 181-183.

2.Черных В.П., Гриценко И.С., Лозинский М.О., Коваленко З.И. Общий практикум по органической химии. Харьков: Золотые страницы, 2002. – С.271-297, 401-406.

3.Лекции по биоорганической химии.

Содержание обучения.

Содержанию обучения должно обеспечивать достижение целей обучения, чему способствует граф логической структуры изучаемой темы (Приложение 1).