- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Задачи на полигибридное скрещивание
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Задачи на неполное доминирование
- •Анализирующее и возвратное скрещивание
- •Задачи на определение групп крови
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Задачи на взаимодействие неаллельных генов
- •Пенетрантность, экспрессивность и плейотропия
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Сцепленное наследование. Сцепленное с полом наследование
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Основы медицинской генетики
- •Медико-генетическое консультирование (мгк)
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •Выделение нуклеиновых кислот
- •Методы амплификации днк и электрофоретическая детекция
- •Механизм пцр.
- •Компоненты реакционной смеси.
- •Этапы амплификации
- •Области применения пцр.
- •Методы детекции продуктов полимеразной цепной реакции.
- •Лигазная цепная реакция (лцр).
- •Рестрикционные методы анализа генома
- •Секвенирование
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа.
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
- •3. Задачи занятия:
- •4. Продолжительность занятия 2 часа
- •5. Контрольные вопросы по теме:
- •6. Задания и методические указания к их выполнению.
- •7. Вопросы к контролям по данной теме:
- •8. Литература для подготовки к занятию:
Механизм пцр.
Компоненты реакционной смеси.
а. Праймеры - искусственно синтезированные олигонуклеотиды, состоящие как правило из 15-30 нуклеотидов, комплементарные 3'-концам анализируемых участков ДНК. Они являются начальными участками фрагментов ДНК, подлежащих амплификации. Обычно вводится два праймера, один из которых комплементарен началу одной цепи, другой - концу второй цепи.
б. Смесь дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (дНТФ) - дезоксирибоаденозинтрифосфата (дАТФ), дезоксирибогуанозинтрифосфата (дГТФ), дезоксириботимидинтрифосфата, (дТТФ) дезоксирибоцитидинтрифосфат (дЦТФ) - являющаяся материалом для синтеза новых цепей.
в. Taq-ДНК-полимераза - термостабильный фермент, выделенный из экстремально термофильной бактерии Thermus aquaticus, обеспечивающий матричный синтез 3'-конца второй цепи ДНК по принципу комплементарности.
г. Реакционный буфер - смесь стабилизаторов, катионов и анионов, обеспечивающий оптимальные условия функционирования полимеразы.
д. Анализируемый образец - препарат ДНК, предположительно содержащий искомую нуклеотидную последовательность, подлежащую амплификации.
Этапы амплификации
Температурный цикл состоит из трех этапов:
1. Термическая денатурация (плавление цепей).
Анализируемый образец представлен двухцепочечной молекулой ДНК, а для проведения требуются одноцепочечные фрагменты. Для этого реакционная смесь нагревается до 92-95˚С, в результате происходит разрушение водородных связей между нуклеотидами и разделение цепей.
2. Отжиг праймеров.
При снижении температуры до 50-60˚С происходит присоединение праймеров к одноцепочечным фрагментам ДНК. Отжиг происходит в соответствии с правилом Чаргаффа и принципом комплементарности, то есть если нуклеотидная последовательность праймера комплементарна последовательности анализируемой цепи, то отжиг произойдет, если некомплементарна – нет.
3. Элонгация (синтез цепей).
На этом этапе температура смеси доводится до 72˚С, что является оптимумом для функционирования фермента Taq-ДНК-полимеразы, при этом синтез второй цепи идет с максимальной эффективностью и точностью.
Указанные этапы составляют один температурный цикл. В ходе ПЦР проводится до 30-35 циклов, что позволяет получить из одного участка ДНК до миллиона копий.
Важным событием явилось создание приборов-амплификаторов (термоциклеров), которые в автоматическом режиме, по специальной программе, осуществляют высокоточное регулирование температуры реакционной смеси и проводят ПЦР за 3-5 часов.
После открытия термостабильной РНК-зависимой ДНК-полимеразы (ревертазы, обратной транскриптазы) появилась возможность диагностики многих заболеваний, вызываемых РНК-содержащими вирусами (вирус гепатита С, пикорнавирусы, и др.).
Области применения пцр.
В настоящее время наиболее быстро развиваются шесть основных направлений ПЦР-диагностики.
1. Диагностика инфекционных заболеваний.
Это связано с тем, что в отличие от ИФА и других методов определения антигенов возбудителя, ДНК-диагностика позволяет непосредственно идентифицировать возбудителя заболевания по его геному.
2. Диагностика онкологических заболеваний.
После открытия онкогенов и генов-супрессоров опухолевого роста и исследований ученых в рамках проекта "Геном человека" появилась возможность определения активности этих генов и, тем самым, указывать на предрасположенность и даже наличие онкологического заболевания у обследуемого субъекта.
3. Диагностика генетических заболеваний.
В настоящее время разработаны тест-системы диагностики большого количества генетических заболеваний, например, муковисцидоза, миодистрофии Дюшенна-Беккера и др.
4. Идентификация личности.
Определение полиморфизма длин рестрикционных фрагментов является индивидуальной особенностью каждого человека (см. ПДРФ).
5. Определение генетической структуры главного комплекса гистосовместимости (HLA).
Представляет особую ценность при трансплантации органов и тканей, так как различие в структуре антигенов гистосовместимости, определяемое генетически, лежит в основе реакции отторжения трансплантата.
6. Диагностика патогенов в пище.
Эта отрасль ДНК-диагностики является пока самой скромной среди представленных, однако является перспективной, так как методы являются более точными, быстрыми и информативными.