Визначання амілолітичної активності (ас)

Сутність методу полягає у гідролізі крохмалю ферментами амілолітичного комплексу до декстринів різної молекулярної маси.

Амілолітична активність характеризує здатність амілолітичних ферментів каталізувати гідроліз крохмалю до декстринів різної молекулярної маси і виражається числом одиниць вказаних ферментів в 1 г препарату.

За одиницю амілолітичної активності (АС) приймають здатність ферменту за визначених значень температури, рН і терміну дії каталізувати до декстринів різної молекулярної маси 1 г крохмалю, що складає 30 % крохмалю, введеного в реакцію.

Прилади та реактиви

-Ваги лабораторні загального призначення не нижче 2-го класу за ГОСТ 244104.

-Колориметр фотоелектричний лабораторний (фотоелектроколориметр) за ГОСТ 12083.

-Прилад для вимірювання рН середовища.

-Термостат або ультратермостат, що забезпечує температуру нагрівання (30,0±0,2)°С.

-Баня водяна.

-Термометри за ГОСТ 215 з границями вимірювання 0-55°С і ціною поділки шкали не більше 0,1°С.

-Стаканчики для зважування за ГОСТ 25336.

-Стакани місткістю від 100 до 2000 см³ за ГОСТ 25336.

-Колби типу Кн місткістю від 100 до 2000 см³ за ГОСТ 25336.

-Колби мірні наливні 1 або 2-го виконання місткістю 100, 200, 250 і 1000 см³ за ГОСТ 1770.

-Лійки типу В за ГОСТ 25336.

-Піпетки 1, 2 і 3-го виконання від 0,5 до 20 см³ і 100 см³ за ГОСТ 20292.

-Бюретка типу І; 1, 2 або 3-го виконання ГОСТ 20292.

-Папір фільтрувальний лабораторний за ГОСТ 12026.

-Крохмаль розчинний за ГОСТ 10163.

-Ацетатний буферний розчин з рН 4,7, приготовлений за ГОСТ 4919.2.

-Натрій фосфорнокислий двозаміщений 12-водний за ГОСТ 4172, розчин молярної концентрації ¹/₁₅ моль/дм³.

-Калій фосфорнокислий однозаміщений за ГОСТ 4198, розчин молярної концентрації ¹/₁₅ моль/дм³.

-Кислота соляна за ГОСТ 3118, розчин молярної концентрації речовини еквівалентна 0,1 моль/дм³ за ГОСТ 4919.2.

-Йод за ГОСТ 4159.

-Калій йодистий за ГОСТ 4232.

-Вода дистильована за ГОСТ 6709.

Підготовка до визначання Приготування розчину крохмалю з масовою часткою 1 % (субстрата)

(1,0±0,01) г крохмалю, який взято із вираховуванням вологи, поміщають в мірну колбу місткістю 100 см³, додають 25 см³ води і перемішують. Потім доливають в колбу іще 25 см³ води, ставлять колбу у киплячу водяну баню не менше ніж на 10-15 хв., безперервно перемішуючи її вміст до повного розчинення крохмалю. Після цього вміст колби охолоджують, додають 10 см³ ацетатного буферного розчину із рН 4,7 (для препаратів грибного походження), фосфатного буферного розчину з рН 6,0 (для препаратів бактеріального походження) або фосфатного буферного розчину з рН 5,6 (для препаратів із дріжджових мікроорганізмів). Об’єм рідини доводять до мітки дистильованою водою і вміст колби перемішують. Розчин повинен бути прозорим.

Розчин крохмалю готують в день проведення аналізу.

Приготування фосфатного буферного розчину з рН 5,6 і рН 6,0

Змішують розчини фосфорнокислого натрія і фосфорнокислого калія концентрацією ¹/₁₅ моль/дм³ у співвідношенні 0,5:9,5 (для рН 5,6) і 1:9 (для рН 6,0).

Величину рН перевіряють на приладі. У випадку відхилення рН буферу від вимагаємого значення, відповідні розчини доводять до норми.