Визначання оцукрюючої активності в очищених препаратах і в культурі гриба, отриманого із Asp. Awamori
Всі операції по визначенню оцукрюючої активності проводять за попереднім Визначанням із наступним доповненням: з метою припинення ферментної реакції додають 5 см3 розчину соляної кислоти. При старанному перемішуванні спочатку додають 3 см3, потім 60 см3 розчину гідроксиду натрію (калію).
Визначання оцукрюючої активності в очищених препаратах і в культурі із Bac. Subtilis
Всі операції по визначенню оцукрюючої активності проводять за попереднім Визначанням із наступними доповненнями:
в якості субстрату беруть розчин крохмалю, приготовлений на буферному розчині з рН 6,0;
після введення 20 см3 розчину йоду додають 52,5 см3 розчину гідроксиду натрію або калію;
при перерахунку знайдених значень швидкості реакції на початкову швидкість (в межах 4-25% гідролізу глікозидних зв’язків крохмалю) треба користуватись градуювальним графіком, який побудовано на основі експериментальних даних.
Обробляння результатів
Оцукрюючу активність (ОС1), од./г в культурі гриба і очищених препаратах із Asp. oryzaе розраховують за формулою:
де е – еквівалентна маса речовини, мкмоль, що знайдена за табл. 3;
m2 – маса препарату, що введений в реакційну суміш, г;
t – термін гідролізу, хв.
Еквівалентну масу речовини, в залежності від різниці титрування контрольного і дослідного розчинів (К - О), визначають за табл. 3.
Таблиця 3
|
(К - О) см3 |
І, мкмоль |
(К - О) см3 |
І, мкмоль |
(К – О) см3 |
І, мкмоль |
|
0,1 |
5,0 |
2,1 |
118,9 |
4,1 |
273,8 |
|
0,2 |
10,0 |
2,2 |
125,5 |
4,2 |
283,2 |
|
0,3 |
15,0 |
2,3 |
132,1 |
4,3 |
292,8 |
|
0,4 |
20,2 |
2,4 |
138,9 |
4,4 |
302,7 |
|
0,5 |
25,5 |
2,5 |
145,8 |
4,5 |
312,8 |
|
0,6 |
30,8 |
2,6 |
152,8 |
4,6 |
323,8 |
|
0,7 |
36,2 |
2,7 |
159,9 |
4,7 |
333,6 |
|
0,8 |
41,6 |
2,8 |
167,1 |
4,8 |
344,4 |
|
0,9 |
47,0 |
2,9 |
174,5 |
4,9 |
355,5 |
|
1,0 |
52,6 |
3,0 |
181,9 |
5,0 |
366,9 |
|
1,1 |
58,2 |
3,1 |
189,5 |
5,1 |
378,6 |
|
1,2 |
63,9 |
3,2 |
197,2 |
5,2 |
390,6 |
|
1,3 |
69,7 |
3,3 |
205,1 |
5,3 |
402,9 |
|
1,4 |
75,5 |
3,4 |
213,1 |
5,4 |
415,6 |
|
1,5 |
81,5 |
3,5 |
221,3 |
5,5 |
428,8 |
|
1,6 |
87,6 |
3,6 |
229,6 |
5,6 |
442,3 |
|
1,7 |
93,6 |
3,7 |
238,1 |
5,7 |
456,2 |
|
1,8 |
99,8 |
3,8 |
246,8 |
5,8 |
470,6 |
|
1,9 |
106,1 |
3,9 |
255,6 |
5,9 |
485,0 |
|
2,0 |
112,5 |
4,0 |
264,6 |
6,0 |
501,2 |
Оцукрююча активність (ОС2), од./г., культурі гриба і в очищених препаратів із Asp. awamori розраховують за формулою:
де (К-0) – різниця титрування контрольного і дослідного розчинів, см3;
50 – коефіцієнт перерахунку на мкмоль глікозидних зв’язків;
m2- маса ферментного препарату, яка введена в реакційну суміш, г;
-
термін гідролізу, хв.
Еквіваленту масу речовини в залежності від різниці титрування контрольного і дослідного розчинів (К-0) визначають за табл.4
Таблиця 4.
|
(К-0), см3 |
І, мкмоль |
(К-0), см3 |
І, мкмоль |
|
0,9 |
45,0 |
2,6 |
169,7 |
|
1,0 |
52,1 |
2,7 |
180,9 |
|
1,1 |
58,7 |
2,8 |
192,3 |
|
1,2 |
63,3 |
2,9 |
209,9 |
|
1,3 |
67,8 |
3,0 |
226,1 |
|
1,4 |
74,7 |
3,1 |
250,6 |
|
1,5 |
81,4 |
3,2 |
278,2 |
|
1,6 |
85,9 |
3,3 |
312,1 |
|
1,7 |
92,7 |
3,4 |
366,2 |
|
1,8 |
99,6 |
3,5 |
452,3 |
|
1,9 |
108,5 |
3,6 |
517,9 |
|
2,0 |
113,1 |
3,7 |
585,7 |
|
2,1 |
119,9 |
3,8 |
662,7 |
|
2,2 |
128,8 |
3,9 |
740,3 |
|
2,3 |
138,0 |
4,0 |
811,9 |
|
2,4 |
150,3 |
4,1 |
891,6 |
|
2,5 |
158,3 |
4,2 |
968,1 |
Оцукрюючу активність (ОС3), од./г, в культурі і в очищених препаратів із Bac. subtilis розраховується за формулою:
,
де І – еквівалентна маса речовини, мкмоль, знайдена за табл. 4;
-
маса ферментного препарату, що введена
в реакційну суміш, г.;
-
термін гідролізу, хв..