Исследуемый материал и реактивы

1. Слюна в разведении 1:5. 2. Раствор крахмала (0,5%). 3. Раствор йода. 4. Буферный раствор (натрий фосфорнокислый двузамещенный Na₂HPO₄ и 0,1М раствор лимонной кислоты).

Ход работы

В 6 пробирок наливают по 2 мл буферного раствора различной величины рН (6.0; 6.4; 6.8; 7.2; 7.6; 8.0). В каждую пробирку наливают по 1 мл 0,5% раствора крахмала и по 1 мл разведенной слюны. Содержимое пробирок перемешивают и ставят в термостат при 37°С на 10 минут. После термостата в каждую пробирку добавляют по 1 капле раствора йода, отмечают наличие или отсутствие синей окраски и определяют рН среды, при котором α-амилаза слюны действует наиболее активно, т.е. где произошел наиболее полный гидролиз крахмала.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, зарисуйте полученный результаты (окраска растворов) и сделайте выводы о влиянии кислотности (рН) среды на скорость гидролиза крахмала α-амилазой слюны, определите оптимальную рН для этого фермента.

Контрольные вопросы

1. Почему при высокой температуре каталитическое действие ферментов прекращается?

2. Почему активность фермента зависит от рН среды?

3. Приведите примеры рН-оптимумов для действия некоторых ферментов.

Лабораторная работа №10 Влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы слюны

Активность некоторых ферментов зависит от природы и концентрации ионов, присутствующих в реакционной среде. Некоторые ионы абсолютно необходимы для нормального действия ряда ферментов.

Вещества, усиливающие действие ферментов, называются активаторами. Активаторы стимулируют действие ферментов, но в отличие от коферментов не принимают участия в реакции.

Некоторые природные и синтетические вещества оказывают избирательное ингибирующее действие на ферменты и используются в качестве лекарственных средств. В больших дозах подобные вещества могут оказаться ядами. Ингибиторами называются вещества, снижающие скорость ферментативной реакции. Ингибиторами нередко являются продукты промежуточных или конечных реакций какого-либо биохимического процесса.

Исследования природы и механизма действия активаторов и ингибиторов ферментов очень важны для изучения кинетики ферментативных процессов, для понимания механизма действия различных лекарственных средств, многих токсических веществ и соединений, которые используются в практике народного хозяйства и здравоохранения.

Принцип метода. Активность амилазы слюны усиливается в присутствии хлористого натрия – специфического активатора амилазы.

Сернокислая медь оказывает тормозящее действие на активность амилазы. Если добавить к смеси, содержащей слюну, крахмал, в одном случае хлористый натрий, в другом – сернокислую медь и в третьем – воду (контрольная проба), то за один и тот же промежуток времени в первой пробирке произойдет полное расщепление крахмала, в третьей – распад его только до декстринов, а во второй обнаружится нерасщепленный крахмал. Крахмал и декстрины открывают реакцией с раствором йода.

Исследуемый материал и реактивы

1 Слюны в разведении 1:5. 2. Раствор крахмала (1%). 3. Раствор йода. 4.Вода. 5. Раствор NаС1 (1%). 6. Раствор СuSО₄ (1%).

Ход работы

В три пробирки налить по 1 мл разведенной слюны. В первую пробирку налить 2 капли воды, во вторую - 2 капли 1% NаС1, в третью - 1% СuSО₄. Во все пробирки добавить по 5 капель 1% крахмала и оставить стоять при комнатной температуре 2 минуты. Далее во все пробирки добавить по 1 капле раствора КJ и по 2 мл воды, перемешать и отметить наличие или отсутствие синей окраски.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, зарисуйте полученные результаты (окраска растворов) и сделайте выводы – какое вещество является активатором, а какое ингибитором для α-амилазы слюны.

Контрольные вопросы

1. Какие вещества называют активаторами и ингибиторами?

2. Какое вещество активирует, а какое тормозит реакцию гидролиза крахмала под Действием α-амилазы слюны?