- •Федеральное агенство по образованИю
- •Оглавление
- •Биохимия простых белков
- •Лабораторная работа №1 Качественные цветные реакции на функциональные группы белков и аминокислот
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №2 Реакции осаждения белков
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия Сложных белков (протеинов)
- •Лабораторная работа №3 Геминовая проба Тейхмана
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №4 Выделение казеиногена из молока и открытие в нем фосфата
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №5 Выделение муцина из слюны и открытие в нем углеводного компонента
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия ферменТов
- •Лабораторная работа №6 Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №7 Специфичность действия амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №8 Влияние температуры на активность α-амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №9 Определение оптимума рН для действия α-амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №10 Влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы слюны
- •Биохимия нуклеиновых кислот
- •Лабораторная работа №11 Кислотный гидролиз нуклеопротеинов дрожжей и определение состава нуклеиновых кислот
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Изучение реакций окисления
- •Лабораторная работа №12 Открытие альдегиддегидрогеназы в молоке
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №13 Обнаружение каталазы крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №14 Открытие пероксидазы
- •Лабораторная работа №15 Получение тирозиназы и окисление тирозина в присутствии кислорода
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Обмен углеводов
- •Лабораторная работа №16 Определение глюкозы в крови (набором реактивов «Глюкоза-фкд»)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия липидов
- •Лабораторная работа №17 Эмульгирование триацилглицеридов желчными кислотами
- •Лабораторная работа №18 Качественная реакция Петтенкоффера на желчные кислоты
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №19 Определение содержания β-липопротеинов (липопротеинов низкой плотности) в плазме крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №20 Качественные реакции на холестерол
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Биохимия белков
- •Лабораторная работа №21 Качественный анализ желудочного сока
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №22 Определение активности аспартатаминотрансферазы( аланинаминотрансферазы) по методу Райтмана-Френкеля(набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочного графика
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №23 Определение мочевины в крови по реакции с диацетилмонооксимом (набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия гормонов
- •Лабораторная работа №24 Качественная реакция на адреналин
- •Лабораторная работа №25 Обнаружение йодтиронинов
- •Витамины
- •Лабораторная работа №27 Качественные реакции на витамины Жирорастворимые витамины
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Водорастворимые витамины
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Биохимия печени
- •Лабораторная работа №27 Качественное определение «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №28 Количественное определение содержания билирубина и его фракций в сыворотке крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Калибровочный график для определения билирубина крови
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №29 Тимоловая проба (проба коллоидоустойчивости)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочной кривой
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия крови
- •Лабораторная работа №30 Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом (набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочного графика.
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия мочи
- •Лабораторная работа №31 Патологические компоненты мочи Качественные реакции на белок в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Определение глюкозы в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественные реакции на кровяные пигменты в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественная реакция на желчные пигменты в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественная реакция на индикан в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Приложение Техника безопасности при работе в биохимических лабораториях
- •Способы взятия крови
- •Множители и приставки, применяемые для обозначений кратных и дольных единиц
- •Фотоколориметрия
- •Построение калибровочных кривых.
- •Подготовка фотоколориметра к работе.
- •Измерение коэффициента пропускания.
- •Разделение белков сыворотки методом электрофореза на бумаге
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •1. Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови.
- •2. Окраска электрофореграмм.
- •3. Количественная оценка электрофореграмм.
- •Метод сахарной нагрузки
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Анализ гликемических кривых
- •Kлинико-диагностическое значение оценки гликемических кривых
- •Количественное определение кислотности желудочного сока
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Экспресс-методы обнаружения патологических компонентов мочи с помощью комбинированных тест-полосок
- •Xод работы
Исследуемый материал и реактивы
1. Раствор яичного белка (1%). 2. Раствор уксусной кислоты (1%). 3. Насыщенный раствор хлористого натрия. 4. Раствор гидроксида натрия (10%).
Ход работы
В 5 пробирок наливают по 0,5 мл раствора яичного белка.
В первой пробирке нейтральный раствор белка нагревают до кипения. Отмечают появление мути, связанное с разрушением водной оболочки вокруг молекул белка и укрупнению его частиц; мицеллы белка несут заряд и удерживаются во взвешенном состоянии.
Во вторую пробирку прибавляют 3 капли 1% раствора уксусной кислоты, создавая слабокислую среду. Раствор белка нагревают до кипения и частицы белка при этом теряют заряд и приближаются к изоэлектрическому состоянию.
В третью пробирку добавляют 15 капель 1% раствора уксусной кислоты и нагревают раствор до кипения.
В четвертую пробирку наливают 15 капель 1% раствора уксусной кислоты для получения сильнокислой реакции, 2 капли насыщенного раствора хлористого натрия и нагревают. Выпадает хлопьевидный осадок белка, так как частицы белка теряют заряд вследствие взаимодействия белка с разноименно заряженными ионами хлористого натрия.
В пятую пробирку добавляют 6 капель 10% раствора едкого натра, создавая щелочную среду, и нагревают. В каждой пробирке определяют рН среды с помощью индикатора. При кипячении жидкости осадок не образуется, поскольку в щелочной среде отрицательный заряд на частицах белка увеличивается.
Отмечают, в какой пробирке произошло осаждение белка, а в какой - нет.
Делают выводы о влиянии рН среды на белковые макромолекулы и выпадение белка в осадок. Результаты оформляют в виде таблицы (1).
Осаждение белков солями щелочных и щелочно-земельных металлов (высаливание).
Осаждение белков из растворов при действии высоких концентраций нейтральных солей щелочных и щелочноземельных металлов называют высаливанием. Метод высаливания позволяет получить белки в кристаллическом виде и применяется для разделения и очистки.
Принцип метода. Реакция высаливания (осаждение белков с помощью больших концентраций нейтральных солей) обусловлена дегидротацией макромолекул белка с одновременной нейтрализацией электрического заряда. Для высаливания различных белков требуется неодинаковая концентрация одних и тех же солей. Глобулины, имеющие большую молекулярную массу, легче высаливаются, чем альбумины. Глобулины осаждаются в полунасыщенном, а альбумины – в насыщенном растворе сернокислого аммония.
Исследуемый материал и реактивы
1. Раствор яичного белка (1%). 2. Насыщенный раствор сульфата натрия. 3. Насыщенный раствор сульфата магния. 4. Насыщенный раствор сульфата аммония. 5. Вода дистиллированная.
Ход работы
В 3 пробирки вносят по 1 мл раствора белка и добавляют по 1 мл насыщенных растворов: Na2S04, Mg2SO4, (NH4)2SO4. После добавления осадителей к растворам белка, смеси необходимо перемешать встряхиванием. Определяют, в какой пробирке объем осадка больше. Затем проверяют растворимость осажденного белка добавлением 2 мл воды. Выясняют, в какой пробирке происходит растворение осадка. Делают вывод о необратимом или обратимом растворении белков. Результаты оформляют с помощью таблицы (2).
Осаждение белка солями тяжелых металлов.
Осаждение белков солями тяжелых металлов, в отличие от высаливания, происходит при небольших концентрациях солей.
Принцип метода. Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (свинца, меди, серебра, ртути и др.) адсорбируют их, образуя с ними солеобразные и комплексные соединения (на этом основано применение белков в качестве противоядия при отравлении солями тяжелых металлов), растворимые в избытке этих солей (за исключением солей AgNO3 , HgCl2), но нерастворимые в воде. Соли тяжелых металлов вызывают необратимое осаждение белков, т.е. денатурацию.