Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор желчи. 2. Раствор сахарозы (5%). 3. Серная кислота концентрированная.

Ход работы

К 10 каплям разведенного (1:2) раствора желчи добавляют 1 каплю 5% раствора сахарозы и осторожно(!), по стенке пробирки, наклоненной под углом 45^о, добавляют равный объем концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей образуется осадок желчных кислот и появляется красно-фиолетовое кольцо. Охлаждая пробирку под краном, осторожно смешивают обе жидкости. Смесь приобретает вишнево-красную окраску.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, зарисуйте полученный результат и сделайте выводы.

Контрольные вопросы

1. Роль желчных кислот в переваривании липидов?

2. Где и их чего в организме человека синтезируются желчные кислоты?

3. Какие соединения называются парными желчными кислотами?

Лабораторная работа №19 Определение содержания β-липопротеинов (липопротеинов низкой плотности) в плазме крови

Большинство липидов находятся в крови не в свободном состоянии, а в составе белково-липидных комплексов (липопротеинов). Фракции липопротеинов отличаются по количеству белка, относительной молекулярной массе липопротеинов и процентному содержанию отдельных липидных компонентов. При электрофоретическом разделении липопротеинов плазмы крови получают фракции хиломикронов и липопротеинов различной плотности: α-липопротеины (ЛПВП) – имеют подвижность α-глобулинов, β-липопротеины (ЛПНП) – обладают подвижностью β-глобулинов, и пре-β-липопротеины (ЛПОНП).

Определение содержания β-липопротеинов в плазме крови имеет значение для диагностики атеросклероза, острых и хронических заболеваний печени, ксантоматоза и другой патологии. Нормальная концентрация β-липопротеинов в сыворотке крови составляет: у женщин – 1,9-6,0 г/л; у мужчин – 2,2-7,4 г/л. Повышение уровня липопротеинов в крови тесно связано с гиперхолистеринемией, поскольку холестерол входит главным образом в состав β-липопротеинов. Увеличение фракции β-липопротеинов может иметь место при диабете, гипотиреозе, некоторых острых гепатитах, резких гипопротеинемиях. Уменьшение может наблюдаться при острых инфекциях, тяжелых анемиях, гипертиреоидизме.

Принцип метода. Спектрофотометрический метод. В основу метода положена способность β-липопротеинов (ЛПНП) осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора. По степени помутнения раствора и судят о концентрации β-липопротеинов в сыворотке крови.

Исследуемый материал и реактивы

1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор.5. Раствор хлорида кальция (0,025М). 6. Раствор гепарина.

Ход работы

В пробирку вносят 2 мл 0,025М раствора хлорида кальция и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют экстинкцию (Е₁) на фотоэлектроколориметре против раствора хлорида кальция в кюветах толщиной слоя 5мм при красном светофильтре (630 нм). Затем в кювету добавляют 0,1 мл раствора гепарина, перемешивают и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность раствора (Е₂) в тех же условиях. Разница Е₂- Е₁ приходится на экстинкцию, обусловленную β-липопротеинами.

Вычисляют разность оптической плотности и умножают ее на 10 – эмпирический коэффициент, предложенный Ледвиной, т. к. построение калибровочной кривой сопряжено с рядом трудностей. В норме содержание β-липопротеинов составляет 3–4,5 г/л. Содержание β-липопротеинов колеблется в зависимости от возраста и пола.