Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Раствор нингидрина (0,5%).

Ход работы

В пробирку наливают 0,5 мл раствора яичного белка и прибавляют 5 капель 0,5% водного раствора нингидрина и нагревают на водяной бане до кипения. Появляется розово-фиолетовое или сине-фиолетовое окрашивание. С течением времени раствор синеет.

Данная реакция не является специфичной, поскольку её дают некоторые амины и амиды кислот.

• Ксантопротеиновая реакция.

Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот – фенилаланина (Phe), тирозина (Tyr), триптофана (Trp), а также свободные перечисленные кислоты. Белки, в которых циклические аминокислоты отсутствуют, не дают ксантопротенновой реакции.

Принцип метода. Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца циклических аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета. При взаимодействии азотной кислоты с тирозином реакция нитрования протекает по следующему уравнению:

1.

тирозин (Tyr) динитротирозин

при подщелачивании возникает хиноидная структура, окрашенная в оранжевый цвет:

2.

динитротирозин натриевая соль динитротирозина

хиноидная форма хиноидной структуры

(насыщенный желтый) (оранжевый)

Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Азотная кислота концентрированная. 3. Гидроскид натрия (10%).

Ход работы

В пробирку вносят 0,5 мл раствора яичного белка. Добавляют 0,5 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают. Вначале появляется осадок свернувшегося белка (под влиянием кислоты), который при нагревании окрашивается в желтый цвет.

После охлаждения в пробирку наливают по каплям 10% раствор едкого натра до появления оранжевого окрашивания вследствие образования натриевой соли динитротирозина.

• Реакция Фоля.

Реакция Фоля указывает на присутствие в белке аминокислот цистеина (Cys) и цистина, содержащих слабосвязанную серу. Метионин (Met), хотя и является содержащей серу аминокислотой, этой реакции не дает, поскольку сера в нем связана прочно.

Принцип метода. Реакция состоит в том, что при кипячении белка с реактивом Фоля (плюмбит натрия в избытке NаОН) под действием щелочи цистеин или цистин легко отщепляет серу в виде сернистого натрия, который с плюмбитом дает черный или бурый осадок сернистого свинца. Интенсивность окраски зависит от количества в белке аминокислот цистеина и цистина, содержащих слабосвязанную серу и от количества белка в растворе. Реакция протекает по следующим уровням:

1. 2. .

цистеин серин осадок черного

цвета

Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Реактив Фоля.

Ход работы

В пробирку вносят 0,5 мл яичного белка и прибавляют 5 капель реактива Фоля. Кипятят и дают постоять 1-2 минуты. При стоянии появляется бурый или черный осадок черного цвета сернистого свинца.

• Реакция Адамкевича.

Реакция Адамкевича открывает в белках аминокислоту триптофан (Trp).

Принцип метода. При добавлении к раствору белка незначительных количеств глиоксиловой кислоты и при подслаивании концентрированной серной кислоты получаем красно-фиолетовое кольцо на границе раздела жидкостей, обусловленное способностью триптофана в кислой среде взаимодействовать с альдегидной группой глиоксиловой кислоты, давая окрашенные продукты конденсации. В качестве источника глиоксиловой кислоты можно использовать ледяную уксусную, в которой глиоксиловая всегда присутствует в небольшом, но вполне достаточном для этих целей количестве.

триптофан глиоксиловая кислота триптофан продукт конденсации

(красно-фиолетовое кольцо)