Исследуемый материал и реактивы

1. Желудочный сок (без соляной кислоты) с молочной кислотой. 2. Фенол (1%) 3. Хлорное железо (1%). 3. Молочная кислота (0,1%) 4. Соляная кислота (0,2%).

Ход работы

Готовят реактив Уфельмана. Для этого к 10 мл раствора фенола добавляют несколько капель хлорного железа и взбалтывают. Жидкость окрашивается в аметистово-фиолетовый цвет. Реактив разводят водой в случае слишком интенсивной окраски. В 3 пробирку наливают по 2-3 мл реактива Уфельмана. В превую добавляют по каплям раствор молочной кислоты, во вторую пробирку – желудочный сок, содержащий молочную кислоту, и в третью – раствор соляной кислоты. В первой и второй пробирках появляется зелено-желтое окрашивание, в третьей – раствор обесцвечивается (реакция отрицательная).

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты и сделайте выводы о реакции и составе желудочного сока.

Контрольные вопросы

1. Перечислите химический состав желудочного сока?

2. Как можно определить рН желудочного сока?

3. Какие виды кислотности различают в желудочном соке?

4. Какова роль соляной кислоты в пищеварении?

Лабораторная работа №22 Определение активности аспартатаминотрансферазы( аланинаминотрансферазы) по методу Райтмана-Френкеля(набором реагентов)

Аминотрансферазы (трансаминазы) – ферменты, осуществляющие трансаминирование аминокислот, содержащие в качестве кофермента фосфопиридоксаль. Аминотрансферазы относятся к индикаторным ферментам, так как трансаминазы обладают высокой активностью внутри клеток различных тканей и органов человека и сравнительно низкой активностью в крови (в тысячу раз ниже). Содержание этих ферментов в тканях неодинакова, так, аспартатаминотрансфераза (АсАТ) в наибольших количествах содержится в печени и сердечной мышце; содержание аланинаминотрансферазы (АлАТ) в печени во много раз выше, чем в сердце. Поэтому определение их активности широко применяется в диагностике заболеваний сердца и печени. Нормальные концентрации АсАТ (или АлАТ) – 0,14-0,68 ммоль/л*ч (0,028-0,19 ммкат/л).

В клинике трансаминазный тест используется не только для постановки диагноза заболевания, но и для прогноза и проверки эффективности методов лечения.

Принцип метода. В результате переаминирования, происходящего под действием аминотрансфераз, образуются щавелевоуксусная (ЩУК) и пировиноградная (ПВК) кислоты, которые в щелочной среде образуют с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные гидразоны. Интенсивность окраски пропорциональна активности ферментов и измеряется фотометрически.

Исследуемый материал и реактивы

1. Сыворотка крови. 2. Субстратный раствор для определения АСТ – 100 мл (D.L.-аспарагиновая кислота – 0,2 моль/л; α-кетоглутаровая кислота – 2,0 ммоль/л; фосфатный буфер рН=7,4). 3. Субстратный раствор для определения АЛТ – 100 мл (D.L.-аланин – 0,2 моль/л; α-кетоглутаровая кислота – 2,0 ммоль/л; фосфатный буфер рН=7,4). 3. Раствор 2,4-динитрофенилгидразина (ДНФГ) – 1 ммоль/л – 100 мл. 4. Стандартный раствор пирувата натрия – 2 ммоль/л – 3 мл. 5. Натрий едкий – 16г (0,4 моль). 6. Физиологический раствор.