Обмен азотсодержащих небелковых веществ

Основную часть азотсодержащих небелковых соединений составляют нуклеиновые кислоты, нуклеотиды, порфирины и ряд других веществ, которые образуются в процессе их обмена. В широком смысле к азотсодержащим небелковым компонентам относят пептиды, аминокислоты и некоторые продукты обмена последних. Однако исследование пептидов и аминокислот более информативно для состояния белково-аминокислотного обмена, а некоторые продукты их метаболизма, определяемые в клинике (так называемый остаточный азот, мочевина и др.), характеризуют в целом состояние азотистого обмена.

1. Исследование общих продуктов азотистого обмена

Некоторые продукты обмена азотистых соединений являются общими как для белковых, так и небелковых веществ. В клинико-биохимических лабораториях с целью диагностики нарушений обмена азотсодержащих соединений чаще всего определяют такие показатели, как остаточный азот, мочевину, аммиак. Остаточный азот – это азот небелковых соединений, остающихся в экстракте после полного осаждения белков крови. В состав остаточного азота входит азот мочевины, пептидов, аминокислот, аммиака, креатина, креатинина, индикана, билирубина и других азотсодержащих низкомолекулярных веществ.

Работа 60. Количественное определение остаточного азота в крови фотоколориметрическим методом

Реактивы. Реактив Несслера^*; трихлоруксусная кислота, 10%-ный раствор; серная кислота, конц.; пероксид водорода, 30%-ный раствор; гидроксид натрия, 0,4 М раствор.

Оборудование. Штатив с пробирками; пипетки вместимостью 1, 5 и 10 мл; глазные пипетки; центрифуга с центрифужными весами; песчаная баня; ФЭК.

Материал. Кровь, взятая из пальца.

Метод основан на способности аммиака, образующегося в результате минерализации безбелковых азотсодержащих соединений крови, давать с реактивом Несслера соединение желтого цвета, интенсивность которого пропорциональна концентрации остаточного азота.

Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл дистиллированной воды, берут из пальца обследуемого микропипеткой 0,2 мл крови и вносят ее в пробирку, несколько раз промывая микропипетку содержимым.

В пробу добавляют 1,3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, содержимое перемешивают стеклянной палочкой и оставляют осаждаться белки в течение 20 мин, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин и сливают в чистую пробирку надосадочную жидкость.

Отбирают 1 мл безбелкового центрифугата в другую пробирку, приливают к нему 3 капли концентрированной серной кислоты и 2 капли раствора пероксида водорода. Ставят пробирки примерно на 30 мин в песчаную баню для минерализации содержимого (до полного просветления раствора).

После охлаждения пробирки до комнатной температуры в нее вносят 10 мл дистиллированной воды, тщательно снимают со стенок минерализат стеклянной палочкой и перемешивают.

Приливают в пробирку по 0,5 мл раствора гидроксида натрия и реактива Несслера. После появления желтого окрашивания фотометрируют опытную пробу против контрольной (10 мл дистиллированной воды и 0,5 мл реактива Несслера) на ФЭКе при 610-650 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 2 см.

Расчет производят по формуле

m2∙5000

х = ————— ,

1∙1000

где х – концентрация остаточного азота в крови, г/л;

m – содержание азота в пробе, найденное по калибровочному графику (рис.10), мг;

5000 – коэффициент пересчета на 1 л крови;

2 – объем уксусного экстракта, мл;

1 – объем безбелкового центрифугата, взятого на анализ, мл.

После упрощения формула приобретает следующий вид:

х = m10.

Оформление работы. По экстинкции рассчитать содержание азота в крови, сравнить его с нормой и сделать вывод о возможных отклонениях.

Практическое значение работы. За норму принимается содержание остаточного азота в крови в пределах 0,2-0,4 г/л. Повышение остаточного азота в крови – азотемия – бывает абсолютная и относительная. Абсолютная вызывается задержкой азотистых шлаков или повышенном образованием их в организме; относительная наблюдается при обезвоживании организма (неукротимая рвота, усиленное потоотделение и др.).

Различают почечную и внепочечную азотемию. Первая наблюдается при нарушении выделительной способности почек (острые и хронические нефриты), причем степень азотемии соответствует тяжести патологического процесса. Внепочечная является следствием повышенного распада белков в организме при лихорадочных состояниях, ожогах, диабете, тяжелых поражениях печени и т.д.