Исследование биологических жидкостей

Состояние биохимических процессов в тканях и органах оценивается прямым и косвенным способом. В первом случае для этой цели берутся на исследование кусочки ткани (биоптаты), а во втором, который более приемлемым для клиники, - биологические жидкости, главным образом кровь и моча.

Кровь является жидкой тканью организма, состоящей из клеток и плазмы. Обмен веществ клеток крови частично отражает общие закономерности метаболизма, по которым можно судить о его сдвигах в других тканях. Однако форменные элементы крови выполняют также специальные функции, для оценки которых изучают соответствующие биохимические показатели. Составные компоненты плазмы (белки, небелковые органические и минеральные вещества) дают необходимую информацию о функциях собственно крови (транспортной, регуляторной и т.д.) и об изменениях метаболизма, произошедших в разных тканях.

Биохимические исследования мочи позволяют судить об изменениях не только в выделительной и мочеобразовательной функциях почек, но и об обмене веществ в других органах и организме в целом.

1. Биохимические исследования крови Работа 85. Определение содержания гемоглобина в крови по его светопоглощению

Реактивы. Гидроксид аммония, 0,4 г/л раствор.

Оборудование. Штатив с пробирками; пипетки вместимостью 0,1 и 10 мл; ФЭК.

Материал. Кровь, взятая из пальца обследуемого.

Метод основан на измерении при 450 нм светопоглощения содержащегося в крови гемоглобина, которое пропорционально его концентрации.

Ход определения. В пробирку отмеривают 8 мл раствора гидроксида аммония. Микропипеткой берут из пальца обследуемого 0,05 мл крови и вносят ее в пробирку. Микропипетку трижды ополаскивают этим же раствором, тщательно перемешивают содержимое, при этом происходит полный гемолиз эритроцитов и просветляется жидкость. Пробирку встряхивают 2-3 мин для полного оксигенирования гемоглобина.

Определяют экстинкцию гемолизированной крови против воды на ФЭКе при 540 нм (светофильтр зеленый) в кювете с толщиной слоя 0,5 см.

Расчет. Содержание гемоглобина в крови определяют по калибровочному графику, построенному по серии растворов кристаллического гемоглобина с известными концентрациями.

Оформление работы. По полученным экстинкциям определить содержание гемоглобина в крови (в г/л), сделать вывод о возможном изменении количества гемоглобина и указать вероятные его причины.

Практическое значение работы. Нормальное содержание гемоглобина у взрослого человека составляет у мужчин 130-160 г/л, у женщин 120-140 г/л. У новорожденных концентрация гемоглобина выше, чем у взрослых, а к концу первого года жизни она уменьшается до 110 г/л и вновь достигает уровня взрослого человека в период половой зрелости. Пониженное содержание гемоглобина (анемия) наблюдается при кровопотерях, недостатке железа в организме, дефиците витамина В₁₂ и фолиевой кислоты, при отравлении лекарствами и токсическими веществами, вызывающими гемолиз эритроцитов (гемолитическая анемия) и т.д. Высокое содержание гемоглобина (200 г/л и выше) имеет место при повышенном количестве эритроцитов в крови (полицитемия).