Определение групп крови системы аво перекрестным способом.

Для выполнения этого способа требуется то же оснащение, что и для определения групп крови с помощью стандартных сывороток. Дополнительно надо иметь стандартные эритроциты группы А(II), В(III). Стандартные эритроциты готовятся из крови резус-отрицательных доноров. Требования, предъявляемые к этикеткам и условия те же, что для стандартных сывороток. Длительность хранения 2-3 суток при температуре +4 – +8 град.С.

Техника определения следующая: к нанесенным в два ряда стандартным сывороткам, внизу дополнительно наносят ряд стандартных эритроцитов А(II), В(III). От исследуемого кровь забирается в пробирку. Ей дают отстояться. Затем к стандартным эритроцитам добавляют сыворотку исследуемой крови, а в стандартные сыворотки вносят эритроциты исследуемой крови. Наблюдение за реакцией проводят в течение 5-ти минут. Через 3 минуты в каждую каплю, где наступила агглютинация, добавляют каплю физиологического раствора, продолжая наблюдение до истечения 5-ти минут. Результаты реакций, полученные при помощи стандартных эритроцитов и стандартных сывороток должны совпадать, т.е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови.

Определение резус-принадлежности.

В повседневной практике определение резус- фактора производится либо с помощью антирезусных (групповых или универсальных) сывороток на чашках Петри в водяной бане, либо с помощью сыворотки для экспресс метода в пробирках без подогрева. Последний метод получает все большее распространение и является предпочтительным.

Метод определения резус-фактора в чашках петри наводяной бане.

Выпускаются универсальные анти-резусные сыворотки, пригодные для определения резус-фактора в эритроцитах всех групп, и групповые антирезусные сыворотки, пригодные для определения резус-фактора только в крови указанной группы. Во втором случае перед проведением определения резус-фактора необходимо определить группу крови, в остальном методика определения совпадает. Использовать эритроциты свежей, не свернувшейся крови для определения резус-фактора не следует. При помещении свежей крови на водяную баню, выпадает фибрин, что может искажать результат. Лучше пользоваться свободными эритроцитами после взятия крови в пробирку и образования в ней сгустка. В чашку Петри наносятся две капли антирезусных универсальных или групповых, если известна группа крови, сывороток разных серий, в которые в соотношении 1:10 вносятся исследуемые эритроциты. Чашка помещается на водяную баню, где температура воды автоматически поддерживается в среднем +46 – +48 град.С. В качестве водяной бани можно использовать любой сосуд емкостью не менее 5-ти литров (при меньшем количестве воды температура ее быстро падает). Чтение результата производят через 10 минут. Если исследуемые эритроциты образуют агглютинаты, это значит они содержат резус-фактор. Если агглютинация отсутствует, исследуемая кровь относится к резус-отрицательному типу. При чтении результата возможны два типа ошибок, которые не зависят от правильного выполнения методики определения. Это так называемый ложно-положительный и ложно-отрицательный результат. Ложный положительный результат часто встречается при исследовании крови больных злокачественными новообразованиями, при заболевании крови и хронических гнойно-воспалительных процессов, при печеночной патологии. Он обусловлен аутоагглютинацией. Для ее проверки в сыворотку больного вносят его собственные эритроциты в соотношении 1:10 и выдерживают в чашке Петри на водяной бане 10 минут. После этого читают результат. При наличии аутоагглютинации видна положительная реакция эритроцитов с собственной сывороткой с образованием агглютинатов.

Ложный отрицательный результат может быть получен при исследовании крови длительных сроков хранения. Определение резус-фактора в крови со сроком хранения свыше 15 суток становится затруднительным, однако способность давать посттрансфузионные реакции такая кровь сохраняет. Примечание: при определении резус-фактора добавлять физиологический раствор в ходе реакции запрещается.