4. Культуральный метод. Принцип метода. Понятие о чистой культуре. Необходимые температурные и газовые условия для культивирования бактерий.

Бактериологический метод исследования (БЛМИ) – метод, основанный на выделении чистых культур бактерий с помощью культивирования на питательных средах и их идентификации до вида на основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, генетических, серологических, биологических, экологических характеристик микроорганизмов. 

(( Бактериологический посев (культуральное или микробиологическое исследование) — лабораторное исследование, при котором биоматериал, в котором предположительно могут находиться патогенные микроорганизмы, помещают в благоприятную для их размножения среду при определенных температурных параметрах с последующей оценкой результатов и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Метод ценен для определения условно-патогенной микрофлоры, определения чувствительности к антибиотикам.))

Принцип метода заключается в идентификации возбудителя на основе выделения чистой культуры. Идентификацию проводят при помощи микробиологических, биохимических, иммунохимических и генетических маркеров. Изолированные штаммы можно хранить, готовить вакцины, изучать чувствительность к лекарственным препаратам, механизмы вирулентности, анализировать эпидемиологические закономерности и т.д. 

Чистая культура – совокупность микробов одного вида. Получают для диагностики инфекции и назначения лечения, для науки, для получения биопрепаратов. 

Чистая культура – бактерии одного вида, выращенные на питательной среде, свойства которых находятся в процессе изучения. 

Штамм – идентифицированная чистая культура микроорганизмов одного вида, выделенная из определенного источника в определенное время. Штаммы одного вида могут несущественно отличаться биохимическими, генетическими, серологическими, биологическими и др. свойствами, а также местом и временем выделения. 

Штамм – микроорганизмы одного вида, выделенные одномоментно из одного источника.

Клон – это совокупность бактерий, являющихся потомством одной клетки.

Я не совсем уверена, что эти этапы прям верные, типо не понятно для кого это

1 этап. Материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на 5% -и кровяной агар, культивируют в эксикаторе со свечой (СО2) 20-24 часа при температуре 37°С;

2 этап. Отбирают подозрительные колонии, дающие а-гемолиз, микроскопируют (окраска по Граму, на капсулу), отсевают в сывороточный бульон;

3 этап. Определяют чистоту культуры (окраска по Граму). Идентификацию проводят по морфологическим, серологическим (р. агглютинации на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в 10%-й желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости (например, при пневмонии) доказывают этиологическую значимость пневмококка (в частности, определяют КОЕ/мл). Определяют также чувствительность к антибиотикам.

Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он ранний, точный, чувствительный и позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.

Газовый состав среды также важен для бактерий. Значительная часть из них нуждается в постоянном притоке молекулярного кислорода. Такие микроорганизмы объединены в группу облигатных аэробов. Меньшая часть бактерий - облигатные анаэробы – способны развиваться только в отсутствии кислорода. Однако, большинство бактерий – факультативные анаэробы, они растут как в присутствии кислорода, так и без него. Для бактерий, культивируемых на плотных питательных средах или в небольших объемах жидких сред достаточно кислорода, присутствующего в атмосфере.

Большинство известных микроорганизмов относится к мезофилам, температурный оптимум для которых лежит в интервале 25-37⁰С. Термофилы способны расти при 45-90⁰С, а психрофилы остаются жизнеспособными при 5 - 10⁰С. Отклонение температурного режима от оптимального неблагоприятно сказывается на жизнедеятельности бактерий. Поэтому культивирование их осуществляют в специальных шкафах – термостатах или термостатированных комнатах, где поддерживается оптимальная заданная температура.

ДОП:

Большинство бактерий растет при рН - 6.8-8,0, то есть в нейтральной среде. Поддержание нейтрального значения рН, особенно важно для кислотопродуцирующих бактерий. В процессе промышленного культивирования бактерий в больших объемах, рН среды регулируется автоматически добавлением растворов бикарбоната натрия или щелочей.