- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомить с методами количественного учета общего микробного числа в исследуемых объектах.
Провести учет выросших колоний после посева из воздуха, почвы и воды, определить коли-титр и коли-индекс воды. Обобщить данные по санитарно-микробиологической оценке исследуемых объектов
Ознакомить с методами санитарно-микробиологического исследования мяса.
Освоить метод бактериоскопического исследования мяса на свежесть.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Посевы, сделанные на предыдущих занятиях для определения общего микробного числа в воздухе, почве и в воде. Для подсчета колоний – трафареты, счетные камеры. Таблицы для расчета коли-титра и коли-индекса. Предметные стекла, краски по Граму, спиртовки, пинцеты, скальпели, пробы мяса различной свежести.
19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
Одним из способов определения общего микробного числа в исследуемых объектах является метод посева определенного объема или навески такого материала на плотные питательные среды. После культивирования посевов приступают к подсчету выросших колоний, по количеству которых судят о степени загрязненности исследуемых объектов.
Количественному учету подлежат все колонии, независимо от их величины, окраски, формы и т.п., принимая каждую колонию за одну бактериальную клетку.
В зависимости от количества выросших колоний при подсчете их поступают различно. Если их число при ориентировочной оценке не превышает 50, то прибегают к фронтальному (сплошному) подсчету. Для этого, повернув чашку вверх дном, при помощи лупы, считают все колонии, отмечая каждую сосчитанную колонию чернилами или восковым карандашом на дне чашки.
Для подсчета колоний при большом их количестве применяют метод выборочного подсчета, пользуясь специальными приемами.
1. Со стороны дна площадь чашки делят восковым карандашом на равное число секторов (на 4, или 6, или 8). Число колоний подсчитывают в одном из секторов. Полученное количество колоний умножают на число секторов. Таким образом вычисляют общее количество колоний, выросших на всей площади чашки.
2. Тем или иным приемом определяют среднее число колоний, которое выросло на площади 1 см2. Предварительно вычисляют площадь чашки по формуле S=πR2. Стандартная чашка имеет радиус 5 см, следовательно, ее площадь равна 3,14 х 25 = 78 см2 .
Среднее число колоний, выросших на площади 1 см2, умножают на площадь чашки. Полученное число выражает общее количество колоний, которое выросло на всей поверхности чашки.
а) использование трафарета (шаблона).
Со стороны дна чашки накладывают трафарет, который имеет пять окон, площадь каждого из них составляет 1 см2. Подсчет колоний осуществляется в пяти окнах, после чего общее количество колоний делят на пять, получая среднее число колоний, выросших на площади в 1 см2.
б) использование счетной камеры.
Она представляет собой стеклянную пластинку, укрепленную на деревянной подставке. Пластинка разделена на 144 квадрата, каждый из которых равен 1 см2; квадраты, расположенные по диагонали, в свою очередь разделены на 9 малых квадратов каждый.
Для подсчета колоний чашку помещают под стеклянную пластинку вверх дном и подсчитывают число колоний в 10 квадратах (еcли колоний много, считают в малых квадратах). Определив среднее число колоний на 1 см2 среды, умножают это число на площадь всей чашки и таким образом вычисляют число колоний на всей поверхности среды.
в) использование аппарата для подсчета колоний.
Принцип подсчета в этом случае остается таким же, как и в счетной камере. Вместе с тем аппарат имеет дополнительные приспособления, позволяющие ускорить подсчет колоний. Для этого он имеет стационарную лупу, подсветку со сменными светофильтрами, авторучку с датчиком; одновременно с отметкой колоний количество их фиксируется на счетчике (рис. 53).
Рис. 53. Аппарат для подсчета колоний бактерий: 1 – столик для чашки Петри; 2 – маркер с датчиком; 3 – счетчик; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения подсветки
При обработке данных по определению количества бактерий в исследуемых объектах принимают во внимание следующие положении;
1. Оценивают только те разведения, при посеве которых выросло на чашках от 30 до 300 колоний.
2. Полученные результаты округляют:
Таблица 4
При количестве бактерий |
Результат округляют |
1 |
2 |
От 1 до 100 От 101 до 1000 От 1001 до 10000 От 100001 до 1000000 |
Полученное число До 10 До 1000 До 10000 |
3. Для определения общего числа бактерий в исследуемых объектах (в почве, в кормах... в 1 г, в воде в 1 мл) необходимо полученное число колоний умножить на степень разведения исследуемого материала. Например, при посеве 1 мл воды в разведении 1:10 на чашках выросло 120 колоний. Содержание бактерий в 1 мл воды составляет: 120 • 10 = 1200 бактерий