- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Тема 45. Возбудитель лептоспироза
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики лептоспироза.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы, пробирки с культурой лептоспир (сапрофиты), готовые препараты-мазки, окрашенные методом Романовского-Гимзе, и мазок, обработанный для люминесцентной микроскопии, МЛ-2, нефлюоресцирующее масло, биопрепараты, микроскоп и осветители ОИ-17, лептоспирозные агглютинирующие сыворотки, антигены для диагностики лептоспироза.
При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:
1. Основные типы лептоспир, их названия и патогенность.
2. Морфологические, тинкториальные и культуральные особенности лептоспир на жидких питательных средах.
3. Особенности бактериологической диагностики лептоспироза.
4. Серологическая диагностика лептоспироза и методика постановки микроагглютинации (РМА).
1. Классификация возбудителя
Сем.: Leptospiraceae
Род: Leptospira
Вид: L. interrogans (патогенные),
L. biflexa (непатогенные).
Имеется 18 серологических групп, в которые входят 170 различных серовариантов (серовары). Например, основными возбудителями у свиней являются лептоспиры Pomona, Tarassovi; у крупного рогатого скота Hebdomatiens, Pomona, Gripotyphosa, Tarassovi.
2. Общая характеристика болезни:
Лептоспироз – инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся у животных преимущественно бессимптомным течением, в типичных случаях – кратковременной лихорадкой, желтухой, гемоглобинурией, абортами и др. Зарегистрирована во многих странах, в т. ч. и в нашей стране. Летальность при клинически выраженной форме 20-25 %.
3. Восприимчивые животные:
- многие виды домашних и диких животных. Болеет и человек. Особая роль в распространении болезни принадлежит грызунам.
4. Патогенез и факторы вирулентности:
- основной фактор передачи болезни – инфицированная вода, в которую возбудитель попадает от больных и переболевших животных, а также лептоспироносителей,
- входные ворота – поврежденные слизистые оболочки,
- лизис лептоспир сопровождается выходом эндотоксинов, под действием которых повышается проницаемость сосудов и лизис эритроцитов, происходят кровоизлияния, развивается гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.
Методы диагностики (рис. 134):
А. Бактериологический метод:
1. Материал для исследования
- при жизни – моча, кровь (в период лихорадки);
- посмертно: моча, кровь, паренхиматозные органы.
Рис. 134. Схема лабораторной диагностики лептоспироза
2. Микроскопия:
а) готовят препарат «раздавленная капля» и микроскопируют с использованием конденсора «темное поле». На темном фоне выявляются тонкие серебристо-белые извитые нити длиною от 6 до 30 мкм с утолщениями и загнутыми в виде крючков концами (рис. 135), плохо окрашиваются анилиновыми красками, по Романовскому-Гимзе – красные, используют также метод «серебрение» по Левадити;
б) грамотрицательные;
в) спор не образуют;
г) капсул не образуют:
д) активно подвижны.
Рис. 135. Возбудитель лептоспироза в темном поле микроскопа из крови больного теленка. Увеличение х400
Рис. 136. Агглютинация лептоспир (образование «паучков» в РМА). Увеличение х400
3. Культивирование:
а) посев на питательные среды, в состав которых входит дистиллированная вода или водопроводная, или буферный раствор с 5-10 % сыворотки кролика;
б) особенности выделения чистой культуры:
- факультативные анаэробы;
- оптимальная температура 28-30°С;
- срок культивирования от 7 дней до 1-2 мес;
в) кулътуральные свойства:
на жидких средах – незначительное помутнение;
- рост определяют путем микроскопии в «темном поле».
г) биохимические свойства:
- изучены недостаточно.
4. Биопроба:
- заражают внутрибрюшинно золотистых хомячков (20-30-дневного возраста) или крольчат-сосунов (10-20-дневного возраста).
Б. Серологическая диагностика:
- используют РМА (реакцию микроагглютинации) и РА.
РМА ставят в лунках агглютинационных пластинок, компоненты:
1) сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 в объеме 0,1 мл;
2) антиген – живые культуры лептоспир различных серогрупп в объеме 0,1 мл. Реакция происходит в течение 1 часа при 30°С.
Положительная реакция проявляется в склеивании лептоспир с образованием «паучков» (рис. 136).
- РА: компоненты 1) исследуемая сыворотка в разведении 1:100; 2) лептоспирозные антигены шести серогрупп.
В. Аллергическая диагностика:
- не применяется.
5. Биопрепараты для специфической профилактики:
- депонированная поливалентная вакцина ВГНКИ (в двух вариантах из различных серогрупп).
6. Биопрепараты для специфической терапии:
- иммунная сыворотка против лептоспироза с.-х. и промысловых животных.
Задания для самостоятельной работы
1. Изучить культуральные особенности лептоспир на жидких средах.
2. Приготовить препараты «раздавленная капля» из культуры лептоспир, микроскопировать их с использованием конденсора «темное поле».
3. Ознакомиться с методикой постановки реакции микроагглютинации при лептоспирозе.