- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим, культуральным свойствам возбудителя сибирской язвы и биопрепараты. Для приготовления препаратов-мазков суточная агаровая культура вакцинного штамма СТИ, реактивы для окрашивания их по Граму, микроскопы; Для приготовления препаратов-отпечатков – печень морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, реактивы для окрашивания на капсулу; для постановки реакции преципитации – сибиреязвенный антиген и преципитирующие иммунные сыворотки, преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки.
При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:
1. Название возбудителя и его патогенность.
2. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя сибирской язвы.
3. Условия, необходимые для формирования капсул и спор, их биологическое значение.
4. Культуральные особенности возбудителя сибирской язвы.
5. Дифференциация возбудителя сибирской язвы от непатогенных антраксоподобных бактерий.
6. Схема бактериологической диагностики сибирской язвы.
7. Реакция преципитации на сибирскую язву.
8. Компоненты реакции преципитации и особенности ее постановки при сибирской язве.
9. Контроли реакции преципитации при сибирской язве, учет и оценка ее результатов.
10. Специфическая профилактика и терапия сибирской язвы.
1. Классификация возбудителя
Сем.: Bacillaceae
Род: Bacillus
Вид:Bac. anthracis
2. Общая характеристика болезни
Сибирская язва – острая инфекционная болезнь, характеризующаяся септицемией, поражением кожи, (карбункулезная форма), кишечника, легких, миндалин (висцеральная форма).
3. Восприимчивые животные:
- наиболее восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, лошади, олени;
- менее – свиньи;
- более – человек.
4. Патогенез и факторы вирулентности:
- основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, трансмиссивный;
- бациллы, попадая в кровь, вызывают септицемию, интоксикацию организма, потерю способности крови к свертыванию;
- образует экзотоксины: отечный, летальный, защитный (протективный);
- внутри инфицированного организма возбудитель образует капсулы.
Методы диагностики (рис. 103):
Рис. 103. Схема лабораторной диагностики сибирской язвы
А. Бактериологический метод:
1. Материал для исследования:
- при подозрении на сибирскую язву категорически запрещено вскрывать трупы;
- ухо павшего животного или толстые мазки крови;
- при вынужденном убое – паренхиматозные органы, отечная ткань.
2. Микроскопия
а) методы окраски: по Граму, на капсулу (методы Ольта, Михина),
б) микрокартина: крупные палочки до 10 мкм, располагаются одиночно, попарно в виде коротких цепочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные – слегка закругленные.
в) грамположительные;
г) в почве и культуре образует споры (рис. 104);
д) в инфицированном организме вокруг палочек формируется капсула (рис. 105);
е) неподвижны.
Рис. 104. Возбудитель сибирской язвы из чистой агаровой культуры. Спорообразование. Увеличение х900
Рис. 105. Возбудитель сибирской язвы из селезенки белой мыши. Окраска по Ольту на капсулы. Увеличение х900
3. Культивирование:
а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ;
б) Особенности выделения возбудителей:
- факультативный анаэроб,
- оптимальная температура 37С,
- срок культивирования 18-20 ч,
в) культуральные свойства:
- на МПБ – прозрачный, на дне пробирки хлопьевидный осадок,
- на МПА – серо-белые колонии до 5 мм, край изрезанный – R-форма (рис. 106),
- на МПЖ – растет в виде «елочки», перевернутой верхушкой вниз.
г) биохимические свойства:
- обладает умеренными сахаролитическими свойствами и протеолитической активностью, разжижает МПЖ;
- гемолиза на кровяном МПА не вызывает.
д) биопроба:
- заражают подкожно белых мышей, морских свинок.
Для идентификации возбудителя используют дополнительные методы:
- на гемолитические свойства,
- фаготипирование, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ),
- тест «жемчужного ожерелья» (выращивание на МПА с пенициллином); при положительном результате – возбудитель принимает шаровидную форму, расположенную в виде цепочек (рис. 107);
- реакцию преципитации.
Рис. 106. Край колонии (R-форма) возбудителя сибирской язвы. Увеличение х10
Рис. 107. Феномен «ожерелья» у возбудителя сибирской язвы под воздействием пенициллина. Увеличение х1350
Б. Серологический метод:
- реакцию преципитации (РП) используют для исследования кожевенно-мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего исследуемого материала, для идентификации выделенных культур.
В. Аллергический метод:
- для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики предложен аллерген ВНИИВиМ (антраксин).
5. Биопрепараты для специфической профилактики:
- живая бескапсульная вакцина-штамм СТИ,
- живая бескапсульная вакцина из штамма 55.
6. Биопрепараты для специфической терапии
- гипериммунная противосибиреязвенная сыворотка,
- противосибиреязвенный гаммаглобулин.
Задания для самостоятельной работы
1. Изучить культуральные свойства вакцинных штаммов СТИ, Ланге, Ценковского на МПА, МПБ и кровяном агаре.
2. Приготовить препараты-мазки из суточной агаровой культуры вакцинного штамма СТИ, окрасить их по Граму и микроскопировать.
3. Приготовить препараты-отпечатки из печени морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, окрасить на капсулу (по Ольту или Михину) и микроскопировать.
4. Провести постановку РП методом наслаивания и оценить ее результаты.