Главный опыт рск

При массовых исследованиях реакцию проводят в одной пробирке в разведении сыворотки 1:5 с антигеном, при повторном исследовании в разведениях одной сыворотки 1:5 без антигена и 1:5 и 1:10 с антигеном.

При исследовании в одной пробирке берут 0,04 мл исследуемой сыворотки и добавляют 0,4 мл физраствора (разведение 1:5).

При постановке реакции в трех пробирках в первую наливают 0,1 мл исследуемой сыворотки и добавляют 0,4 мл физраствора (разведение 1:5). Из первой пробирки 0,2 мл переносят во вторую и 0,1 мл - в третью, в которую затем добавляют 0,1 мл физраствора (разведение 1:10).

Реакцию ставят по схеме главного опыта (табл. 16). Главный опыт сопровождается следующими контролями:

- негативная и бруцеллезная сыворотки в разведениях 1:5 и 1:10 с антигеном и 1:5 без антигена (по схеме главного опыта);

- гемолитическая система (0,6 мл физраствора и 0,4 мл гемолитической системы).

Учет результатов РСК проводят визуально. При постановке реакций в одной пробирке (при массовом исследовании) учет проводят один раз - сразу после извлечения штативов из водяной бани; при исследовании в трех пробирках - через 3-4 ч, когда в контрольных пробах с позитивной сывороткой эритроциты осядут на дно пробирки, или на следующий день (пробирки с реакцией хранят в холодильнике).

Таблица 16

Схема главного опыта РСК

Компоненты	При массовом исследовании		для повторного исследования
	пробирки с исследуемыми сыворотками	контроль гемолитической системы	Пробирки для каждой исследуемой сыворотки			контроль гемолитической системы
			1	2	3
Исследуемая сыворотка	0,04	-	0,04	0,04	0,02	-
Физраствор	0,16	0,6	0,36	0,16	0,18	0,6
Инактирование сывороток
Антиген в рабочем титре	0,2	-	-	0,2	0,2	-
Комплемент в рабочем разведении	0,2	-	0,2	0,2	0,2	-
Водяная баня 20 мин при 37-38С
Гемолитическая система	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4	0,4
Водяная баня 20 мин при 37-38С

Результаты реакции оценивают в плюсах по следующей схеме:

(++++) - отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная и бесцветная;

(+++) - гемолиз 25% эритроцитов;

(++) - гемолиз 50% эритроцитов;

(+) - гемолиз 75% эритроцитов;

(-) - полный гемолиз эритроцитов, осадок отсутствует, жидкость интенсивно окрашена гемоглобином.

Степень задержки гемолиза эритроцитов определяют по шкале, которую готовят перед учетом реакции. Для этого из реакции выбирают 5 пробирок с полным гемолизом и жидкость из них сливают в одну. Из этой жидкости готовят разведения с меньшим процентом гемолиза по следующей схеме:

Таблица 17

Компоненты	Номера пробирок
	1	2	3	4	5
Гемолизированная жидкость Физиологический раствор Процент гемолиза	1,0 - 100	0,75 0,25 75	0,5 0,5 50	0,25 0,75 25	- 1,0 0

Степень гемолиза в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют путем сравнения со степенью гемолиза в пробирках шкалы, процент гемолиза выражают в плюсах.

Диагностическая оценка. При исследовании сывороток в одной пробирке (в разведении 1:5 с антигеном) все сыворотки, давшие задержку гемолиза на один плюс и выше, исследуют повторно в тот же или на другой день в трех пробирках в разведениях 1:5 и 1:10 с антигеном и 1:5 без антигена.

Реакцию считают положительной при задержке на два-четыре плюса в одном или двух разведениях сыворотки (1:5 или 1:10) и полным гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена); сомнительной — при задержке гемолиза с оценкой один плюс. При получении сомнительного результата сыворотки крови от животных через 15-20 дней исследуют повторно. При этом животных, с сывороткой крови которых получена дважды сомнительная реакция, считают реагирующими положительно.

Реакция длительного связывания комплемента (РСДК)

Эту реакцию, как более чувствительную, применяют вместо РСК при исследовании на бруцеллез, туберкулез, кампилобактериоз.

Основные принципы постановки РДСК от РСК мало чем отличаются друг от друга.

Особенность этой реакции заключается в том, что при постановке главного опыта бактериолитическую систему выдерживают при трех температурных режимах: 1) при комнатной температуре 15 мин; 2) при 4°С в холодильнике – 18-20 ч; 3) на водяной бане 37-38°С -15 мин.

После добавления компонентов, входящих в гемолитическую систему, пробирки с реакцией помещают в водяную баню при 37-38°С на 10 мин.

Результаты РДСК учитывают точно так же, как и при РСК.