Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Овладеть методикой приготовления препаратов для микроскопии и их окраски простым методом. Ознакомиться с основными формами бактерий.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки со взвесью бактериальных культур (кишечная палочка, стафилококки, вакцинный штамм бациллы сибирской язвы). Набор растворов красок – разведенный фуксин, щелочная метиленовая синь; предметные стекла, спиртовки, бактериологические петли, микроскопы.

Таблицы, схемы.

3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии

Препараты для микроскопии готовят на предметных стеклах. Для работы необходимо иметь специально приготовленные предметные и покровные стекла, которые должны быть чистыми и обезжиренными.

Новые стекла моют в теплой воде с мылом. Для обезжиривания их помещают на 2-3 дня в смесь Никифорова (равные объемы спирта и эфира в сосуде с притертой пробкой).

Если предметные или покровные стекла были в употреблении, их обрабатывают хромовой смесью, промывают водой, кипятят 30-40 мин в 5%-ном растворе соды.

Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем почистить сухой тканью. Капля воды, нанесенная на хорошо обезжиренное стекло, растекается равномерно. На недостаточно обезжиренном стекле вода распадается на мелкие капли.

В зависимости от характера исследуемого материала при его взятии используют бактериологическую петлю или пастеровскую пипетку. Петлю делают из платиновой или нихромовой проволоки длиной 5-6 см и закрепляют в петледержателе. На конце проволоки делают петлю. Петлю держат, как карандаш. Рабочую часть петли стерилизуют в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем петледержатель.

Приготовление окрашенного препарата (мазка) состоит из нескольких этапов (рис. 7): 1) приготовление; 2) высушивание; 3) фиксация; 4) окраска.

Рис. 7. Схема приготовления препарата-мазка

1. Приготовление мазка

На предметном стекле с обратной стороны восковым карандашом обозначают место мазка диаметром 2-3 см.

Из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, стерильной петлей берут каплю материала и распределяют на предметном стекле. Из культур, выращенных на плотной среде, петлей с поверхности берут небольшое количество материала, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора или воды и размазывают по стеклу.

Из плотного патологического материала (печень, почки, селезенка и др.) делают мазки-отпечатки. Для этого стерильными ножницами отрезают кусочек органа и прикладывают к предметному стеклу, делая один или несколько отпечатков.

2. Высушивание мазка

Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в термостате.

3. Фиксация мазка

Мазки фиксируют после полного высыхания с целью:

1) закрепить мазок на стекле;

2) убить бактерии;

3) убитые бактерии лучше воспринимают краску.

Фиксацию мазков осуществляют одним из двух способов: физическим и химическим. Физический метод заключается в трехкратном проведении обратной стороной мазка через пламя спиртовой горелки, задерживая в пламени на 1-2 секунды.

При химическом способе мазок погружают в жидкости:

а) этиловый спирт 96°-ный на 10-15 минут, или

б) смесь равных объемов спирта и эфира на 10-15 мин, или

в) ацетон - 5 минут.

4. Окраска мазка

Бактерии различно относятся к красителям, эти свойства называют тинкториальными.